В норме сое у коров

ОСЕДАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ , скорость оседания эритроцитов (СОЭ), свойство эритроцитов осаждаться на дне сосуда при сохранении крови в несвёртывающемся [несвертывающемся] состоянии. Применяемый термин “РОЭ” неточен, т. к. реакции при этом не происходит. Механизм О. э. сложен и зависит от разнообразных факторов. Один из осн. факторов, влияющих на скорость О. э.,— качеств. и количеств. изменения белковых компонентов плазмы крови. При увеличении содержания в плазме крупнодисперсных белков происходит ускорение О. э., при увеличении кол-ва частиц мелкодисперсных белков — замедление. На показатели О. э. влияют вязкость крови, кол-во эритроцитов, их физико-химич. свойства, кислотно-щелочное равновесие, содержание в крови жёлчных [желчных] пигментов и жёлчных [желчных] к-т, соотношение

холестерина и лецитина и др. факторы.

У домашних и с.-х. животных в норме различаются два типа СОЭ — ускоренная (у лошадей) и замедленная в различной степени (у др.видов животных). Для определения скорости О. э. применяют методы Панченкова,Неводова и Вестергрена. По Панченкову скорость О. э. за 1 ч в норме (в мм); для лошади 40— 70, для кр. рог. скота 0,5—1,5, для свиньи 1,0—9,0, для собаки 2,0—6,0. По методу Неводова СОЭ определяют в спец. пробирках — эритроседиометрах (рис.). Высоту столбика осевших эритроцитов отмечают через 15, 30, 45 и 60 мин, а также спустя 24 ч. По Неводову скорость О. э. за 1 ч в норме для лошади в среднем составляет 43 (38—48). По методу Вестергрена высоту столбика оседающих эритроцитов отмечают каждые 5 мин в течение 1 ч. У здоровой лошади она равна: через 15 мин — 18; 30 мин — 40; 45 мин — 70; 1 ч — /5; через 24 ч — 108.

Ускорение СОЭ наблюдается при всех формах анемий и особенно при инфекц. и инвазионных болезнях, при гнойных, воспалит. процессах, злокачеств. новообразованиях. Замедление СОЭ отмечают у новорождённых [новорожденных] , при утомлении, сильном гипергидрозе, механич. и гепатогенной желтухе, гастроэнтеритах, нек-рых формах колик, столбняке, инфекц. энцефаломиелите.

Лит.: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, 2 изд., М., 1975.

После взятия кровь помещается в одноразовую пробирку, содержащую антикоагулянт. Важно правильно рассчитать количество крови. В нашей лаборатории анализы проводятся на сравнительно небольшом количестве материала, что позволяет снизить дискомфорт животного при взятии крови для анализа.

Расшифровка клинического анализа крови у животных может быть проведена на основе следующих сведений:

Гематокрит (Htc) — объемная фракция эритроцитов в крови

Норма (%) — кошка 30-51; собака 37-55.

Повышение данного показателя может свидетельствовать об эритроцитозе (повышение количества эритроцитов), дегидратации (это различные заболевания ЖКТ, а также диабет) или снижении объема циркулирующей плазмы (характерно для перитонита и ожоговой болезни).

Снижение гематокрита говорит о выраженной анемии, повышении объема циркулирующей плазмы (наблюдается при сердечной или почечной недостаточности, геперпротеинемии). Низкий гематокрит также характерен для хронических воспалительных процессов, травм, голодания, хронической гиперазотемии, онкологических заболеваний.

Эритроциты (RBC) — форменные элементы крови, содержащие гемоглобин.

Норма (х 10 12 /л) — кошка 5,2-10,8; собака 5,4-8,0.

Повышение эритроцитов в крови может быть вызвано первичным эритроцитозом (усилением выработки эритроцитов). Также это состояние может быть вызвано реактивными эритроцитозами (вследствие вентиляционной недостаточности при бронхолегочной патологии и при пороке сердца). Не исключены и вторичные эритроцитозы, вызванные увеличением продукции эритропоэтинов (при гидронефрозе и поликистозе почек, а также при наличии новообразований почек и печени).

Понижение эритроцитов может свидетельствовать о различных анемиях (железодефицитной, гемолитической, гипопластической, B12-дефицитной). Это состояние характерно при острой кровопотере, поздних сроках беременности, хронических воспалительных процессах, гипергидратации.

Средний объем эритроцита (MCV) — характеризует тип анемии

Норма (мкм 3 ) — кошка 41-51; собака 62-74.

Повышение MCV наблюдается при макроцитарных и мегалобластических анемиях, а также при анемиях, могущих сопровождаться макроцитозом (гемолитических).

При нормальных показателях могут наблюдаться нормоцитарные анемии (апластическая, гемолитическая, кровепотери, гемоглобинопатии), а также анемии, сопровождающиеся нормоцитозом (регенераторная фаза железодефицитной анемии, миелодиспластические синдромы).

Снижение показателя MCV характерно для микроцитарных анемий (железодефицитной, сидеробластической, талассемии) и анемий, могущих сопровождаться микроцитозом (гемолитическая, гемоглобинопатия).

Скорость оседания эритроцитов
(СОЭ) — неспецифический показатель диспротеинемии, сопровождающей процесс болезни.

Норма (мм/час) — кошка 1-6; собака 2-6.

Увеличение СОЭ характерно для любых воспалительных процессов, сопровождающихся накоплением в крови фибриногена, a- и b- глобулинов. Также СОЭ увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся распадом тканей (инфаркты, злокачественные новообразования и т. д.), интоксикациях и отравлениях, болезнях обмена веществ (при сахарном диабете), болезнях почек, сопровождаемым нефротическим синдромом (гиперальбуминемией), заболеваниях печени, ведущих к выраженной диспротеинемии, при беременности, шоках, травмах и оперативных вмешательствах.

Читайте так же:

  • Корова средней упитанности "коровы средней упитанности 500кг 24 гол Коровы цена: 55 000 руб / шт. Коровы стельные цена: 75 000 руб / шт. Крупный рогатый скот: Коровы чернопестрой породы 250 голов […]
  • Привязное содержание коров размеры КОРОВНИК , осн. производств, здание ферм и комплексов кр. рог. скота, предназначенное для содержания коров. Различают К. для привязного (в осн. на 200 — 400 голов) и беспривязного (200 — […]
  • Летний рацион коров Ответьте на несколько вопросов на нашем сайте oleg-inform.ru Нам необходимо знать Ваше мнение Заранее выражаем свою благодарность Летом коровы основное количество питательных веществ […]
  • Сколько земли нужно для 1 коровы Одно из основных направлений специализации крестьянских хозяйств — производство мяса и молока. Поэтому при организации каждого хозяйства нужно соблюдать принцип обоснованного сочетания […]
  • Орбенин корова (Клоксациллин) Лечение и профилактика маститов у коров в сухостойный период Показания к применению Орбенин DC применяют для лечения мастита бактериальной этиологии у коров в сухостойный […]
  • Стоматит коровы ВЕЗИКУЛЯРНЫЙ СТОМАТИТ (Stomatitis vesicularis), острая вирусная болезнь кр. рог. скота, непарнокопытных и свиней, характеризующаяся лихорадкой, повышенным слюноотделением, образованием […]

Наиболее сильные повышения СОЭ (более 50-80 мм/час) характерны для миеломной болезни, злокачественных новообразований, заболеваний соединительной ткани и системных васкулитов.

Снижение СОЭ характеризуется гемолитической анемией.

Норма (х 10 9 /л) — кошка 200-600; собака 160-500.

Повышение уровня тромбоцитов свидетельствует об инфекциях, воспалениях, неоплазии.

Снижение характерно для уремии, токсемии, гипоадренокортицизма, иммунных расстройств, кровотечений.

Гемоглобин (HGB) — кровяной пигмент, содержащийся в эритроцитах. Основная функция — перенос кислорода и углекислого газа.

Норма (г/л) — кошка 90-170; собака 120-170.

Повышение гемоглобина свидетельствует о первичных или вторичных эритроцитозах, а также относительном эритроцитозе при дегидратации.

Снижение характерно при анемиях (железодефицитной, гемолитической, гипопластической, B12-фолиеводефицитной), острых кровопотерях, скрытых кровотечениях, эндогенной интоксикации (злокачественные опухоли и их метастазы), поражении костного мозга, почек и некоторых других органов.

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) — определяет насыщенность эритроцитов гемоглобином.

Норма (г/дл) — кошка 31-35; собака 32-36.

Повышение характерно для гиперхромных анемий (сфероцитоз и овалоцитоз).

Снижение показателя сопровождает гипохромные анемии (железодефицитную, сферобластическую и талассемию).

Среднее содержание гемоглобина в эритроците
(MCH) — используется для характеристик анемии.

Норма (пг) — кошка 13-18; собака 22-28.

Повышение характерно для гиперхромных анемий (мегалобластических, цирроза печени).

Снижение может свидетельствовать о гипохромных анемиях (железодефицитной) и анемиях при злокачественных опухолях.

Нужно отметить, что только специалист, ветеринарный врач, может учесть все нюансы данных клинического анализа крови. При соблюдении комплексного подхода в диагностике возможно учесть коррелированность многих показателей и разносторонние проявления заболевания. Располагая данными о более общей картине заболевания, врач, при комплексном подходе, после осмотра животного и получении результатов анализов, ставит более правильный диагноз (снижается риск ошибки)

О количестве лейкоцитов в клиническом анализе крови и их дифференцировке читайте в нашей следующей статье.

Добрый день. В предыдущих ответах уже достаточно точно указали, что СОЭ или скорость оседания эритроцитов — это базовый параметр общего анализа крови.

Общий анализ крови — проводится в качестве начальной лабораторной диагностики, для первичной оценки здоровья или клинического состава крови.

В чем заключается измерение СОЭ.

Измерение скорости оседания эритроцитов заключается в свойстве крови, а точнее эритроцитарной массы оседать (выпадать в осадок). В результате в верхней части, используемой пробирки для анализа, остается плазма, а в нижней — эритроциты. Временная шкала составляет 1 час.

Нормопоказатели, как правило не должны превышать 30 мм/ч (в зависимости от возраста и пола).

Причины, когда СОЭ может быть «повышена»?

Вот список наиболее частых состояний приводящих к увеличению СОЭ:

  • Инфекционно-воспалительные процессы.
  • Онкологические патологии.
  • Заболевания крови.
  • Прием препаратов салицилатной группы.
  • Беременность, менструация.
  • Кровотечения.
  • Хочу отметить, что данный показатель может быть отклоненным, даже при отсутствии каких-либо заболеваний. Это наблюдется у небольшой части населения.

    Поэтому его и называют неспецифичным или косвенным параметром. Который всегда требует дополнительного обследования, в случае отклонения от нормы.

    С уважением. Надеюсь мой ответ был полезен.

    Получение и подготовка крови к исследованию.

    Кровь рекомендуется брать лучше утром в одни и те же часы (до кормления и водопоя), после отдыха и успокоения животного.

    Стабилизация крови.

    Для предупреждения свертывания крови используют один из следующих антикоагулянтов (на 10 мл крови): щавелевокислый натрий (калий или аммоний) — 0,01-0,02 г: (оксалатная кровь); лимоннокислый натрий — 0,02 г (цитратная кровь); фтористый натрий — 0,01 г; гепарин — 1 капля раствора, содержащего в I мл 5000 ME гепарина (гепаринизированная кровь). Антикоагулянты вносят в пробирку, в которую затем собирают кровь; пробирку закрывают резиновой пробкой и тщательно смешивают содержимое 1-2 минуты.

    Получение сыворотки крови. Собранную в пробирку или стеклянный цилиндр кровь ставят сначала в теплое место (на 15- 20 минут), а потом в холодное. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок сосуда стеклянной палочкой или тонкой проволочкой. Полученную сыворотку осторожно отсасывают. Для лучшего отделения сыворотки от сгустка пробирку со свернувшейся кровью можно процентрифугировать 10-15 минут при 2-3 тыс. оборотов.

    Получение плазмы.

    Стабилизированную кровь наливают в пробирку и центрифугируют 10 минут при 1,5-2,0 тыс. оборотов в минуту. В результате оседания форменных элементов крови в пробирке образуется прозрачная жидкость — плазма, которую отсасывают и переносят в другую пробирку.

    Исследование физических свойств крови.

    Из физических свойств крови важное диагностическое значение имеет определение ее удельного веса, вязкости и скорости свертывания, а также реакции оседания эритроцитов.

    Определение удельного веса крови.

    Удельный вес крови опредетяют по методу Гаммершлага (в смеси бензола с хлороформом) или по способу Филиппса (в растворах медного купороса).
    В норме удельный вес крови колеблется в следующих пределах: v крупного рогатого скота — 1,040-1,059; овцы — 1,037-1,049, козы — 1,041-1,061; яка — 1,045-1,063, лошади — 1,038- 1 062; свиньи — 1,042-1,060, кошки — 1,053-1,057, собаки — 1 044-1,056, кролика — 1,048-1,060, курицы — 1,039-1,057; гуся — 1,045-1,063.
    Повышение удельного веса крови отмечается при поносах, рвоте, лихорадке, экссудативных и транссудативных процессах и гипергидрозах, диабете, нефритах, отравлении угарным газом. Понижение удельного веса наблюдается при истощении и различных анемиях.

    Определение вязкости крови.

    Вязкость крови определяют вискозиметром Гесса или Детермана. У здоровых животных вязкость крови составляет: у крупного рогатого скота — 4,6-5,2, овцы — 4,4-6,0, козы — 5,0-6,0, верблюда — 4,3-5,3, лошади — 3,4- 7,2, свиньи — 4,0-5,0, собаки — 3,8-5,5, кошки — 4,0-5,0, кролика — 3,5-4,5, курицы — 4,5-5,5.
    Повышенная вязкость крови наблюдается при некоторых лихорадочных заболеваниях (плеврите, воспалении легких, перитоните), при сердечной недостаточности в период декомпенсации. Понижение вязкости встречается при первичных и вторичных анемиях, истощении.

    Определение скорости свертывания крови.

    На край хорошо обезжиренного предметного стекла, поставленного под углом 50°, наносят каплю крови. Стекая по стеклу, капля оставляет след. Через каждые 30 секунд по следу крови проводят острием иглы. Появление нитей фибрина на острие иглы указывает на начало свертывания крови. В норме скорость свертывания крови равна у крупного рогатого скота 5-6, лошади — 8-10, собак — 10 минутам.
    Ускорение свертывания крови отмечается при миоглобинурии, крупозном воспалении легких, постгеморрагических анемиях. Замедление свертывания крови встречается при анемиях, нефритах, холемиях, сибирской язве, гемофилии, удушье.

    Определение реакции оседания эритроцитов.

    Реакцию оседания эритроцитов (РОЭ) нужно определять не позже двух часов после взятия крови. Реакцию оседания эритроцитов определяют или методом Неводова, или методом Панченкова.

    Метод Неводова.

    РОЭ определяют при помощи эритроседиометра, представляющего собой пробирку длиной 17 см и шириной 9 мм, с делениями от 0 до 100. Объем градуированной части пробирки равен 10 мл. В эритроседиометр вносят 0,02 г щавелевокислого натрия и наполняют кровью до отметки 100, закрывают резиновой пробкой и тщательно смешивают кровь с антикоагулянтом. Пробирку ставят в штатив и отмечают на часах начало исследования. Уровень столба эритроцитов определяют через 15, 30, 45 и 60 минут, а затем через 24 часа.
    Метод Неводова обычно используется для определения РОЭ у лошадей. В норме у лошади РОЭ по этому методу через 15 минут составляет 40 (34-46), через 30 минут — 55 (49-61), через 45 минут — 58 (55-61), через 60 минут — 59 (56-62), через 24 часа — 65 (59-71), а у крупного рогатого скота — 2-4 деления за 24 часа.

    Метод Панченкова.

    РОЭ определяют в аппарате, состоящем из штатива и нескольких градуированных капилляров. Каждый капилляр градуирован от 0 до 100 делений, на уровне «0» (верхняя часть капилляра) нанесена метка «К» (кровь), а на уровне цифры «50» — метка «Р» (реактив). Объем градуированной части капилляра равен 100 мм3. Для постановки реакции капилляр смачивают 5%-ным раствором лимоннокислого натрия, а затем насасывают этот же раствор до метки «Р» и выдувают на часовое стекло. После этого тем же капилляром 2 раза набирают кровь до метки «К», каждый раз выдувая кровь на часовое стекло. Раствор и кровь на часовом стекле тщательно смешивают стеклянной палочкой, образовавшуюся смесь набирают в капилляр до метки «0». Капилляр устанавливают в штатив, учет высоты столба осевших эритроцитов ведут через 1 час и 24 часа.
    В норме скорость оседания эритроцитов за один час по методу Панченкова колеблется в следующих пределах (в мм): у крупного рогатого скота — 0,5-1,5; овцы 0,5-1,0, козы — 0,3-1,0, верблюда — 1,0-4,0, лошади — 40,0-70,0, свиньи — 2,0-9,0, собаки — 2,0-6,0, лисицы серебристо-черной — 1,0-14,0, голубого песца — 1,0-5,0, норки — 1,0-3,0, соболя — 2,0-4,0, куницы- 2,0-4,0, кролика — 1,0-2,0, курицы — 2,0-3,0.
    У молодых животных РОЭ более ускорена, чем у взрослых. Ускорение РОЭ наблюдается при многих лихорадочных инфекционных заболеваниях (инфекционная анемия, кровопятнистая болезнь, мыт, ангина и др.), лучевой болезни и т. д. Замедление РОЭ отмечается при механических илеусах и энцефаломиелите, желтухах, гастроэнтеритах, паралитической миоглобинурии лошадей и др.

    Исследование химических свойств крови.

    При исследовании химических свойств крови определяют: количество гемоглобина, билирубина, показатель резервной щелочности, количество в сыворотке крови общего белка, каротина, кальция и неорганического фосфора.

    Определение количества гемоглобина (по Сали).

    Количество гемоглобина определяют в гемометре ГС-2, состоящехм из колодки с тремя гнездами, градуированной пробирки, капиллярной и глазной пипеток. В двух крайних гнездах находятся или стандартные пробирочки, содержащие раствор солянокислого гематина, или стеклянные палочки соответствующего цвета. В среднее гнездо вставляют градуированную пробирку, имеющую две шкалы. Одна шкала (от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммпроцентах (г%), а другая (от 10 до 140) — в процентах (в единицах гемометра); 10006 соответствует 16,67 г% гемоглобина.
    В градуированную пробирку до метки «10» вносят глазной пипеткой 0,1 н. раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой насасывают 20 мм 3 крови и осторожно выдувают ее в раствор кислоты. Затем этот раствор втягивают и выдувают обратно в пробирку несколько раз, чтобы смыть оставшуюся в пипетке кровь. Перемешивают и оставляют на 5 минут. В результате смешивания крови с соляной кислотой гемоглобин переходит в солянокислый гематин, раствор при этом приобретает коричневый цвет. Затем по каплям добавляют дистиллированную воду, постоянно помешивая до тех пор, пока цвет жидкости в пробирке не сравняется с цветом боковых стандартных пробирок. По делению шкалы, которое соответствует уровню раствора в пробирке, устанавливают количество гемоглобина.

    Гиперхромемия — увеличение количества гемоглобина в крови — отмечается при поносах, рвоте, потливости, при образовании экссудатов и транссудатов.

    Определение билирубина в сыворотке крови (по Ван-ден-Бергу).

    В центрифужную пробирку берут 1 мл сыворотки крови к 2 мл спирта, смешивают и центрифугируют 20 минут. Затем к 1 лед прозрачного центрифугата прибавляют 0,5 мл спирта и 0,25 мл свежеприготовленной смеси диазореактивов Эрлиха (см. ниже). Окрасившуюся жидкость переносят в стаканчик колориметра и колориметрируют, сравнивая ее со стандартом, находящимся во втором стаканчике. Расчет производят по формуле:

    где: С1 — количество билирубина (в мг%), С2 — концентрация стандартного раствора, Н1 — высота столба исследуемой жидкости (в мм), Н2 — высота столба стандарта (в мм), 5 — степень разведения сыворотки.

    Смесь диазореактивов Эрлиха готовят из двух растворов:

    1) сульфаниловая кислота — 0,2 г, соляная кислота (удельный, вес 1,19) З мл, дистиллированная вода — 200 мл;

    2) азотнокислый натрий — 0,5 г, дистиллированная вода — 100 мл.

    Оба раствора хранят в темной посуде. Для анализа приготовляют смесь двух растворов, для чего берут 10,0 мл первого раствора и 0,3 мл второго.
    В качестве стандарта применяют раствор сернокислого кобальта (2,161 г предварительно высушенного реактива доводят дистиллированной водой до 100 мл), который хранят в темноте.
    Для определения разновидностей билирубина и, следовательно, для дифференциации желтух применяют прямую и непрямую реакции.

    Прямая реакция.

    На 1 мл сыворотки крови наслаивают 0,5 мл смеси диазореактивов. Появление на границе жидкостей бордово-красного кольца указывает на наличие билирубина, проведенного через печень.
    Положительная реакция всегда свидетельствует о патологии. Если кольцо появляется быстро, то это указывает на механическую желтуху, замедленная реакция отмечается при катаральной желтухе, циррозе печени, болезнях сердца.

    Непрямая реакция.

    К 1 мл сыворотки крови прибавляют 2 мл спирта, смешивают и центрифугируют. Затем 1 мл прозрачного центрифугата наслаивают в другой пробирке на смесь диазореактивов (1,5 мл). На границе жидкостей появляется цветное кольцо от розового до красно-фиолетового цвета. Положительная реакция зависит от наличия в сыворотке крови билирубина, не проведенного через печень. В норме эта разновидность билирубина обнаруживается у лошади. Повышенное содержание такого билирубина наблюдается при гемолитической желтухе.
    В норме в сыворотке крови содержится билирубина у лошадей от 0,37 до 1,35 мг%, крупного рогатого скота — 0,01-0,30 мг%;
    У других животных содержание билирубина в сыворотке очень незначительное (следы).

    Определение резервной щелочности (по Неводову).

    К 10 мл 0 01 н. раствора соляной кислоты прибавляют 0,2 мл крови, смешивают и титруют из микробюретки 0,1 н. раствором едкого натра до появления мути и выпадения хлопьев. Расчет производят по формуле:

    х =(1 — а)*2000,

    где: х — резервная щелочность (в мг%),
    а — количество миллилитров 0,1 н. раствора едкого натра, израсходованного на титрование.

    Периодически для контроля к 10 мл 0,01 н. раствора соляной кислоты добавляют 1-2 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина и титруют 0,1 н. раствором едкого натра, до появления розовой окраски (нейтрализация). На титрование должен быть израсходован 1 мл раствора щелочи.
    У животных в норме показатели щелочного резерва крови по Неводову составляют (в мг%): у крупного рогатого скота — 460-540, овцы — 460-520, козы — 380-520, верблюда 700-780, яка — 520-620, лошади — 470-620, лисицы серебристо-черной 340-500.
    Ацидоз — снижение щелочного резерва — возникает в результате нарушения обмена веществ при белковом перекармливании, скармливании силоса, содержащего масляную кислоту, при атониях преджелудков, родильном парезе, ацетонемии, диабете, ящуре и других заболеваниях.
    Алкалоз, или базеоз — повышение щелочного резерва — встречается редко и наблюдается главным образом при пироплазмозе и кровопятнистой болезни лошадей, селикозе, фибринозном воспалении легких, шоке.

    Определение общего белка в сыворотке крови.

    Общий белок определяют рефрактометрически, а белковые фракции — методом электрофореза на бумаге. Количество общего белка и соотношение белковых фракций в сыворотке крови здоровых животных приведены в табл. 37.

    Определение каротина в сыворотке крови (по Ф. А. Рачевскому).

    В пробирку вносят 0,2 мл свежей сыворотки крови, приливают
    4 мл спирта (96°) и тщательно смешивают. Добавляют 2 мл петролеиного эфира или чистого бензина с температурой кипения ниже /о . Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют на несколько минут. Затем приливают по каплям 2 мл дистиллированной воды, в результате чего между спиртом и эфиром образуется поверхность раздела. Каротин находится в петролейном эфире бензине) и окрашивает верхний слой жидкости в желто-зеленоватыи цвет. Петролеиныи эфир с каротином насасывают в микропику и наливают его по каплям в фарфоровую чашечку, подогрело до 40 . После нанесения каждой капли ожидают полного высыхания её.

    Для проверки результатов рекомендуется параллельно ставить такую же пробу со стандартным раствором каротина.
    Содержание каротина в сыворотке крови вычисляют но формуле:

    X=0.04/K

    где: х — количество каротина (в мг%),
    К — количество миллилитров эфирного (или бензинового) экстракта каротина, израсходованного на образование j желтого кольца.
    В норме у крупного рогатого скота содержится в сыворотке крови от 0,5 до 3,0 мг% каротина, у кур — 0,3-0,5 мг%.

    Определение кальция в сыворотке крови (по де-Ваарда).

    В центрифужную пробирку (лучше с остроконечным дном) берут 1 мл сыворотки крови, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония, тщательно смешивают, оставляют на 30 минут, после чего жидкость центрифугируют 15 минут при 1,5-2 тыс. оборотов в минуту. Затем отсасывают жидкость над осадком пастеровской пипеткой с грушей (или сливают). К осадку добавляют 2 мл 2%-ного раствора аммиака, смешивают встряхиванием и центрифугируют 10 минут; промывание осадка повторяют еще два раза. В заключение отсасывают жидкость над осадком, к осадку добавляют 0,3 мл 50%-ного раствора серной кислоты, смешивают. Ставят пробирку в водяную баню при температуре 50-70° и выдерживают до растворения осадка, изредка помешивая жидкость стеклянной палочкой.
    После растворения осадка жидкость титруют 0,01 н. раствором перманганата калия до появления бледно-розового окрашивавия, сохраняющегося не менее 1-2 минут.
    Одновременно ставят «слепой» опыт. В пробирку берут вместо 1 мл сыворотки крови 1 мл дистиллированной воды, а все остальное производят таким же образом, как и в основном опыте.
    Подсчет количества кальция производят по формуле:

    х = 0,2-(а — б)*К*100,

    Где: х — искомое количество кальция в сыворотке крови (в мг%)

    а — количество миллилитров 0,01 н. раствора перманганата калия, израсходованного на титрование в основном опыте,
    б — количество миллилитров 0,01 н. раствора перманганата калия, израсходованного на титрование в «слепом» опыте.

    К — фактор к титру 0,01 н. раствора перманганата калия. В норме у животных количество кальция в сыворотке составляет (в мг %): у крупного рогатого скота — 9,5-12,5, овцы — 11-12,5, козы — 11,0-13,0, верблюда — 9,1-13,3, лошади — 12,0-16,0, свиньи — 11,5-12,5, собаки — 9,5-12,0, курицы — 170-22,0.

    Гипокальцемия — уменьшение количества кальция в сыворотке крови — встречается при рахите, остеомаляции, нефрозе, родильном парезе, бронхопневмонии, экссудативном плеврите, анемии, лейкемии, диабете, остро протекающих тяжелых заболеваниях, хроническом сепсисе, тетании, недостаточности паращитовидных желез, лейшманиозе, контагиозной плевропневмонии, кровопятнистой болезни и др.
    Гиперкальцемия — увеличение содержания кальция в сыворотке крови — наблюдается при остеомаляции, деформирующих артритах, гипервитаминозе, гиперпаратиреоидизме, сердечной недостаточности и т. д.

    Определение неорганического фосфора в сыворотке крови (по Аммону и ГинсСергу).

    В пробирку вносят 1 мл сыворотки крови, добавляют 3 мл дистиллированной воды и 1 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают и, дав постоять 10 минут, фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют.
    Затем берут две широкие пробирки и в одну из них (опыт) вносят 2,5 мл фильтрата сыворотки, 0,5 мл раствора молибдена, 1 мл 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты и до 6 мл дистиллированной воды. В другую пробирку (стандарт) вливают 1 мл рабочего стандартного раствора фосфора, 1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20°о-ного раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл раствора молибдена, 1 мл 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты и до 6 мл дистиллированной воды. Реактивы в обе пробирки следует вносить по возможности одновременно. Содержимое пробирок хометре размешивают и через 10 минут колориметрируют в колори.

    Количество неорганического фосфора определяют по формуле:

    Где; X искомое количество неорганического фосфора (в мг%),
    H1 — высота столбика жидкости с фильтратом сыворотки крови (в мм),
    H2 — высота столба жидкости со стандартным раствором фосфора (в мм).

    Раствор молибдена готовят смешиванием двух растворов:

    1) молибденовокислого аммония — 25 г, дистиллированной воды — 300 мл;

    2) дистиллированной воды — 125 мл, концентрированной серной кислоты — 75 мл.

    Рабочий стандартный раствор фосфора готовят из основного стандартного раствора фосфора. Для приготовления последнего (его готовят впрок) берут 4,388 г однозамещенного фосфорнокислого калия, предварительно высушенного в эксикаторе, и добавляют дистиллированной воды до 1 л. Хранят раствор в темной посуде с добавлением к нему 0,5 мл хлороформа.
    Для приготовления рабочего стандартного раствора фосфора, что делают в день исследования, берут 1 мл основного раствора и добавляют к нему дистиллированной воды до 50 мл; в 1 мл рабочего раствора содержится 0,02 мг фосфора.
    Для приготовления 1-ного раствора аскорбиновой кислоты необходимо взять 1 г аскорбиновой кислоты и добавить 0,1 н. раствора соляной кислоты до 100 мл. Раствор хранят в темной посуде, годен не более одного месяца.
    В сыворотке крови животных в норме содержится неорганического фосфора (в мг%): у крупного рогатого скота 4,5-7,5, овцы — 7-8, козы — 6-8, верблюда — 5,1-6,7, лошади — 7-7,3,: свиньи — 5-6, собаки — 3-5,8, кошки — 6-8, кролика — 6-7.

    Гипофосфатемия— уменьшение количества неорганического фосфора в сыворотке крови — наблюдается При рахите, остеомаляции, гиперпаратиреоидизме, сахарном диабете, недостатке витамина D.
    Гиперфосфатемия — увеличение содержания неорганического фосфора — отмечается при гипервитаминозе D, заживлении переломов костей, нефрозах, гломерулонефритах, гипопаратирериДизме.

    Подсчет форменных элементов крови у животных.

    В клинической практике обычно определяют количество эритроцитов и лейкоцитов, а иногда и тромбоцитов.

    Определение количества эритроцитов.

    Подсчет количества эритроцитов производят в счетной камере с сеткой Горяева (камера Горяева). Кровь набирают в смеситель (меланжер) до метки «0,5», а затем до метки «101» насасывают жидкость-разбавитель, при этом кровь разбавляют в 200 раз. В качестве разбавителя применяют 0,9%-ный или 3%-ный раствор поваренной соли, жидкость Гайема (сулема — 0,5 г, хлористый натрий — 1 г, сернокислый натрий — 5 г, дистиллированная вода — 200 мл) или раствор йода (йод кристаллический — 0,3 г, йодистый калий — 0,4 г, лимоннокислый натрий — 2 г, дистиллированная вода — 100 мл).
    Кровь с разбавителем тщательно перемешивают 2-3 минуты, удаляют 2-3 капли из капилляра меланжера, а следующую каплю наносят под заранее притертое покровное стекло на сетку камеры- Заряженную камеру закрепляют на предметном столике микроскопа и выжидают 2-3 минуты, чтобы эритроциты осели на дно. Для обнаружения сетки камеры пользуются объективом 8, а при подсчете эритроцитов применяют объектив 40. Подсчет начинают с левого большого квадрата (разделенного на 16 маленьких квадратиков), а затем подсчитывают эритроциты еще в 4 больших квадратах, расположенных по диагонали сеткикамеры.
    Количество эритроцитов в 1 мм3 крови определяют по формуле:

    где: х — искомое количество эритроцитов в 1 мм 3 крови,
    а — сумма эритроцитов, подсчитанных в 5 больших квадратах,
    б — степень разведения крови,
    в — количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах,
    4000 объем разбавленной крови над одним маленьким
    квадратиком сетки камеры (в мм 3 ). При разведении крови (1 : 200) и подсчете эритроцитов в 5 больших квадратах формула значительно упрощается и будет выглядеть так:

    х = а * 10 000.

    Эритропения, или олигоцитемия, — уменьшение количества эритроцитов — характерна для первичных и вторичных анемий. Сопоставление числа эритроцитов с количеством гемоглобина позволяет делать важные дифференциально-диагностические заключения.

    Эритроцитоз, или нолицитемия — увеличение числа эритроцитов — встречается при сгущении крови вследствие потери организмом воды при обильном потоотделении, поносах, во время образования экссудатов и транссудатов, в начальной стадии инфекционных и лихорадочных процессов, при непроходимости тонкого отдела кишечника.
    Здоровых животных приведено в табл. 38.

    Лейкоцитоз, или гиперлейкоцитоз — повышение количества лейкоцитов — встречается очень часто. Лейкоцитоз может быть:

    1) физиологическим — при беременности, у новорожденных, после сильной физической нагрузки и т. д.; 2) медикаментозным — после введения белковых препаратов, алкалоидов, жаропонижающих средств и т. д., 3) патологическим — при инфекционных болезнях, воспалительных процессах, интоксикациях и др.

    Лейкопения — понижение числа лейкоцитов — наблюдается при тяжелых инфекционных и токсических состояниях и свидетельствует об угнетении кроветворных органов или об их истощении.
    Подсчет количества тромбоцитов (по Реес-Эккеру). В смеситель для лейкоцитов набирают до метки «0,5» консервирующую тромбоциты жидкость (лимоннокислый натрий — 3,8 г, 40%-ный формальдегид — 0,2 мл, бриллианткрезиловая синь — 0,1 г, дистиллированная вода — до 100 мл). Затем в смеситель до метки «1» набирают капиллярную кровь из уха и до метки «И» раствор Тюрка (для гемолиза эритроцитов) и хорошо размешивают (2- 10 минут). После этого заряжают счетную камеру, которую на 15-20 минут ставят в чашку Петри с комочком мокрой ваты на дне для ускорения оседания тромбоцитов.
    Тромбоциты подсчитывают в 20 больших квадратах сетки (т. е. в 320 маленьких квадратиках). Определяют количество тромбоцитов в 1 мм 3 крови по формуле:

    X=(A*B)/(B*(1/4000))

    где: х — искомое количество тромбоцитов в 1 мм3 крови, а — количество подсчитанных клеток, б — степень разведения крови (в 20 раз), в — количество сосчитанных маленьких квадратиков (320),
    1/4000 — объем разведенной крови в камере над одним маленьким квадратиком сетки (в мм 3 ). сокращенном виде формула выглядит так:

    х = а*25

    Тромбоцитоз — увеличение числа тромбоцитов — встречается при инфлюэнце лошадей, плеврите, миоглобинурии, саркоматозных поражениях и др.

    Тромбоцитопения — уменьшение количества тромбоцитов — наблюдается при инфекционной анемии лошадей, кровопятнистой болезни, стахиботриотоксикозе.

    Подсчет форменных элементов крови у птиц.

    Техника подсчета кровяных клеток у птиц несколько затруднена. Это объясняется тем, что у них как эритроциты, так и тромбоции — формы и имеют ядра, поэтому в обычных условиях не дифференцируются. Эти кровяные клетки не разрушаются уксусной кислотой, что препятствует определению числа лейкоцитов. В связи с этим при подсчете форменных элементов крови у птиц вначале в счетной камере подсчитывают общее количество клеток (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), а затем в окрашенном мазке каждые 1000 эритроцитов устанавливают число лейкоцитов и тромбоцитов. В заключение перерасчетом определяют абсолютное количество отдельных видов клеток в 1 мм 3 крови.

    Определить количество клеток в крови у птиц можно также прямым способом в камере Горяева, для чего применяют раствор с красителями. По К. С. Фоминой и В. И. Шмельковой, берут 0,1%-ный раствор азура на изотоническом растворе поваренной соли (раствор можно использовать в течение месяца). Кровь разводят в большом меланжере в соотношении 1 : 100 теплым раствором азура (38-40°). Немедленно после заполнения меланжера проиводят тщательное размешивание Крови встряхиванием кровомесителя. Через 10-15 минут заряжают камеру. Эритроциты подсчитывают в 5 больших квадратах, лейкоциты и тромбоция определяют по всей сетке камеры (225 больших квадратов)Я Вычисление количества кровяных клеток производят по обычным формулам.

    Определение лейкоцитарной формулы.

    Лейкоцитарную формулу определяют в окрашенных мазках крови.
    Приготовление мазков крови. Мазки готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах.
    Хороший мазок доля;ен быть тонким, равномерным (несколько уже предметного стекла), длинным (не менее 2/3 стекла) и иметь свободные концы.
    Фиксация мазков. Мазки высушивают па воздухе фиксируют в метиловом спирте 3-5 минут или используют другие фиксаторы: этиловый спирт — 20 минут, смесь эфира со спиртом поровну — 20 минут, ацетон — 5 минут.I
    Окраска мазков. Мазки окрашивают красками, растворенными в нейтральной дистиллированной воде. Для определения реакции воды применяют следующий метод. 50 мл воды,в химический стаканчик, добавляют одну каплю 0,2%-ного раствора. При кислой реакции вода окрашивается в красно-фиолетовый, при нейтральной — в бледно-розовый, а прощелочной — в желтовато-соломенный цвет. Усредняют кислую воду 1%-ным раствором двууглекислой соды, а щелочную 1%-ным раствором уксусной кислоты.

    Указанные растворы добавляют по каплям к окрашенной индикатором воде до появления темно-розового цвета. Затем вычисляют количество усредняющего створа на больший объем дистиллированной воды. Раскраску мазков производят по Романовскому-Гимза. Для этого помещают над чашкой на стеклянные палочки мазком вверх, наливают на них раствор краски Романовского — Гимза (на 1 мл нейтральной дистиллированной воды берут 1-2 капли краски) и красят 20-35 минут в зависимости от температуры окружающего воздуха. Можно также мазки положить в чашку Петри на спички (мазком вниз) и подлить под них краску. Затем мазок промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Правильно окрашенный мазок должен иметь розовато-фиолетовый оттенок.

    Мазки можно окрашивать и без предварительной фиксации их. Для этого на высушенный мазок наносят 20 (30) капель спиртового раствора краски Романовского -Гимза (на 20 мл спирта берут 5 мл краски). Через 5 минут И краске добавляют 20 (30) капель дистиллированной воды и продолжают окрашивать еще 20-25 минут. Краску смывают водопроводной водой. Мазки сушат на воздухе.

    Техника выведения лейкоцитарной формулы.

    Лейкоцитарная формула выражает процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов. В норме она слагается из соотношения базофилов, эозинофилов, нейтрофилов (юных, палочко ядерных и сегменто ядерных), лимфоцитов, моноцитов (табл. 39).
    Для определения лейкоцитарной формулы в окрашенном мазке крови обычно подсчитывают 200 лейкоцитов. Количество клеток каждой формы лейкоцитов делят на 2, получая процентное выражение.
    При подсчете лейкоцитов используют метод Шиллинга. Для этого на препарате выбирают 4 участка — два в начальной и два в конечной его части. В каждом участке отыскивают под иммерсионной системой микроскопа край мазка, подсчитывают здесь лейкоциты и передвигают препарат вглубь последовательно еще на 3 поля зрения. Затем смещают мазок на одно поле в сторону и возвращаются снова к краю препарата. Такие смещения мазка производят до тех пор, пока не будет подсчитано 50 лейкоцитов на одном участке. После этого находят таким же образом по 50 лейкоцитов на каждом другом участке мазка. Всего должно быть подсчитано 200 лейкоцитов.
    Регистрацию отдельных форм лейкоцитов осуществляют или на специальном одиннадцати клавишном счетчике или в таблице Егорова.

    Определение лейкоцитарного профиля.

    Для более точного и полного суждения об изменениях в лейкоцитарном составе крови необходимо определить лейкоцитарный профиль, который выражает абсолютное содержание отдельных форм лейкоцитов в 1 мм3 крови. С этой целью подсчитывают общее количество лейкоцитов

    в 1 мм 3 крови и выводят лейкоцитарную формулу. Затем количество лейкоцитов умножают последовательно на процент каждого вида клеток лейкоцитарной формулы и делят на 100.
    В лейкоцитарной формуле при различных заболеваниях могут происходить следующие основные изменения:

    1) увеличение или уменьшение процента тех или иных клеток — нейтрофилия или нейтропения (резкая нейтропения называется агранулоцитозом), лимфоцитоз или лимфопения, эозинофилия или эозинопения, моноцитоз или моноцитопения, базофилия;

    2) появление молодых незрелых форм (юные, миелоциты и даже промиелоциты);

    3) появление дегенеративных изменений в лейкоцитах — токсической зернистости и вакуолей в протоплазме, пикноза, лизиса, вакуолизации или полисегментации ядра, появление гигантских форм нейтрофилов.

    Наиболее частым и практически самым важным является нейтрофильный лейкоцитоз. При этом лейкоцитозе наблюдается увеличение количества (повышение процента) незрелых нейтрофильных клеток в периферической крови, что именуется «сдвигом (ядра) влево», так как при записи лейкоцитарной формулы молодые клетки принято ставить слева от зрелых нейтрофилов.
    По степени регенерации нейтрофильный лейкоцитоз разделяют на следующие три группы:

    1) нейтрофилия с простым регенеративным сдвигом — количество палочкоядерных нейтрофилов возрастает не более чем на 13% при нормальном или несколько уменьшенном количестве сегментоядерных;

    2) нейтрофилия с резким регенеративным (гиперрегенеративным) сдвигом — появляются юные, миелоциты и даже промиелоциты;

    3) нейтрофилия с дегенеративным сдвигом — уменьшается количество сегментоядерных нейтрофилов, появляются атипичные клетки с дегенеративным ядром и протоплазмой, «сдвиг влево» углубляется за счет палочкоядерных, но без дальнейшего увеличения процента более молодых форм.

    Определение качественных изменений клеток крови.

    Исследование мазков крови, кроме определения лейкоцитарной формулы и лейкоцитарного профиля, позволяет также установить наличие тех или иных морфологических изменений эритроцитов и лейкоцитов, включая появление ядерных форм эритроцитов. В специально окрашенных мазках можно определить количество гранулоцитов (ретикулоцитов), т. е. эритроцитов с зернистой субстанцией. По количеству таких форм эритроцитов можно судить о степени регенерации крови.

    СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

    Эритроцит: (eritros- красный), красные кровяные тельца у позвоночных содержит до 33% дыхательного пигмента, окрашенного белкового соединения хромопротеида, известного как гемоглоблин.

    Это красные, кровянные, безъядерные (утрачивает ядро во время развития у млекопитающих) тельца. на месте утраченных ядер, образуется незначительное углубление, что придает форму двояковогнутого диска( с такой формой облегчается газообмен). Эритроциты имеют «строму-остов» клетки и оболочку.

    Изменчивость количества эритроцитов под влиянием разных факторов:

    Оно повышается, при низком барометрическом давлении ( при подъеме на высоту или глубоководном спуске, при интенсивной физической нагрузке, обезвоживании, недостаточном поступлении кислорода в кровь.

    Уменьшение количества эритроцитов в крови (анемию)- отмечают при кровопотерях, интенсивном разрушение эритроцитов, еще одной из причин, является несбалансированный рацион кормления по белковому и минеральному соотношению.

    Функции эритроцитов:

    транспортировка кислорода из легких в ткани.

    участие в переносе кислорода от тканей к легким.

    транспорт питательных веществ.

    Участие в подержании pH крови

    участие в процессах иммунитета, эритроцит выступает, как адсорбент.

    СОЭ, ускорение и замедление скорости оседания. Скорость оседания эритроцитов или реакция оседания эритроцитов (СОЭ), это не хитрая манипуляция, помогающая в постановке диагноза и выявлении заболевания.

    Результаты СОЭ нельзя рассматривать, как точное подтверждение заболевания, следует провести дополнительные исследования.

    Скорость оседания эритроцитов колеблется в зависимости от физиологических особенностей, вида, пола, возраста и условий содержания животного (у лошади она 64,0 мм/час, у крупного рогатого скота-0,58 мм/час, у овцы-0,8, мм/час, у свиньи-30 мм/час ) и зависит от величины отрицательного заряда мембрана эритроцитов и белка плазмы.

    Кровь для исследования допустимо брать как из артерий, так и из вен.

    Скорость оседания увеличивается, при патологических процессах процессах, поэтому СОЭ служит надежным показателем здоровья животного.

    При повышении в крови глобулина, фибриногена скорость оседания возрастает.

    Так же при некоторых инфекционных заболеваниях и наличии злокачественных опухолей.

    Методы исследования СОЭ. За историю существования гематологии было предложенно и применено в ветеринарии достаточное количество методов, более актуальными считают методы: Неводова, Панченкова, Вестергрена.

    Метод Неводова: Для постановки СОЭ необходимо наличие пробирки Неводова или эритроседиомет р- это градуированная пробирка объемом 10 мл, шириной 9 мм и высотой 17 см с резиновой пробкой. На шкале пробирки нанесено 100 делений (снизу вверх), с левой стороны шкалы имеются цифра от 2до 14 (снизу вверх), указывающий на ориентировочное количество эритроцитов в миллионах в 1 мм 3 , а с правой-цифры от 2 до 125 г/л.

    Для постановки реакции используют щавелевокислый натрий его вносят в пробирку в количестве 0,02 г и наполняют кровью до отметки 100, закрывают резиновой пробкой и тщательно смешивают кровь с антикоагулянтом. Пробирку помещают в штатив. Уровень СОЭ устанавливают через 15, 30, 45,60 минут, а затем через 24 часа.

    Этот метод применяют для лошадей. в норме у лошадей по этому методу через 15 минут от 33-45, через 30 минут-49-61, через 45 минут-55-62, через 60 минут-56-62, через сутки- 59-71, а у крупного рогатого скота за сутки 2-4 деления.

    Метод Панченкова: для определения СОЭ используют специальный штатив (аппарат Панченкова), состоящей из штатива и капилляров. Каждый капилляр расчерчен от 0 до 100 делений, на верхней части капилляра на уровне «0» видна метка «К», что означает кровь, а на уровне «50»- метка «Р», что значит реактив.

    Техника проведения: капилляр смачивают 5-%-ым раствором лимоннокислого натрия, (его мы используем в виде антикоагулянта), а затем заполняют этим раствором до отметки «Р»и выдувают на часовое стекло. Раствор и кровь на часовом стекле тщательно смешивают стеклянной палочкой,полученную смесь набирают в капилляр до метки «0». Капилляр устанавливают в штатив, учет высоты столба осевших эритроцитов фиксируют 15, 30, 45,60 минут, а затем через 24 часа. Активное оседание отмечают в период между 15- и 45-ю минутами.

    В норме СОЭ по Панченкова за за час колеблется: у крупного рогатого скота:0,5- 1,5; овцы-0,5-1; козы-0,3-1;лошадь- 40,0-70,0; свинья — 2,0-9,0.

    Следует отметить, что чем моложе животное , тем быстрее будет проходить реакция СОЭ.

    Метод Вестергрена: Аппарат Вестергрена аналогичен машине Панченкова, различие в размерах. Длина пипетки 80 см, ширина 2,5 мм. На боковой части нанесены деления от 0 до 200.

    Метод и время определения тот же, что и при методике Панченкова.

    В норме у лошади -75-145 мм за час, у крупного рогатого скота и у мелкого рогатого скота 1- 3 мм.

    Количество эритроцитов подсчитывают в 1 мм 3 крови. Для подсчета необходимы смесители (меланжеры), счетные камеры, специальные жидкости для разбавления крови, микроскоп и конечно же время.

    В данное время в ветеринарной медицине эти методики используются редко. Всё большее применение находят приборные методы исследования.

    Заключение. Итак, оседание эритроцитов — это свойство эритроцитов прилегать ко дну сосуда, при предварительной обработке крови антикоагулянтом.

    Процесс оседания эритроцитов сложен и зависит от многих факторов и причин.Основной, принято считать, качественные и количественные изменения белковых компонентов плазмы крови. При увеличении содержания в плазме крупнодисперсных белков происходит ускорение оседания эритроцитов, при увеличении количества частиц мелкодисперсных белков — замедление.

    Показания СОЭ нельзя рассматривать как строго специфические подтверждения той или иной болезни. Однако показатели СОЭ имеют большое вспомогательное значение в диагностике заболеваний животных.

    Список использованной литературы

    Байматов В.Н. Ветеринарный клинический лексикон/ В.Н. Байматов, В.М. Мешков, А.П. Жуков, В.А. Ермолаев. – М.: КолосС, 2009. — 327 с.

    Веремей, Э.И. Распространение и профилактика заболеваний пальцев и копытец у крупного рогатого скота / Э.И. Веремей, В.А. Журба // Ветеринарная медицина Белоруссии. — 2003. — № — 2. – С. 32-35.

    Даричева, Н.Н. Основы ветеринарии: учебно-методический комплекс / Н.Н. Даричева, В.А. Ермолаев / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. — Ульяновск, 2009. — Том 1. – 201 с.

    Ермолаев В.А. Гемостазиологические аспекты гнойной хирургической патологии крупного рогатого скота / В.А. Ермолаев // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии: Мат. междунар. научно-методической конф. ВГАУ. -Воронеж, 1997. –С.67-68.

    Ермолаев В.А. Оперативные методы исследования животных: методическое указание для проведения лабораторно-практических занятий по клинической диагностике и внутренним незаразным болезням сельскохозяйственных животных / В.А. Ермолаев, А.М. Липатов, Н.К. Шишков, С.Н. Золотухин. — Ульяновск: УГСХА, 1995.- 14 с.

    Ермолаев В.А. Основы ветеринарии /В.А. Ермолаев, Л.А. Громова, О.А. Липатова, Л.Б. Конова, А.И. Козин, Ю.С. Докторов/ Под редакцией профессора В.А. Ермолаева. Рекомендовано учебно-методическим объединением высших учебных заведений Российской Федерации по образованию в области зоотехнии и ветеринарии для студентов высших учебных заведений в качестве учебно-методического пособия по специальности 310700 — «Зоотехния». — Ульяновск: УГСХА, 2004. — 485с.

    Ермолаев, В. А. Биохимические и некоторые иммунологические показатели крови у собак, при лечении инфицированных ран сорбентами природного происхождения/В. А. Ермолаев, Е. М. Марьин, C. Н. Хохлова, О. Н. Марьина//Известия Оренбургского ГАУ. 2009. -№4.-С. 174-177.

    Ермолаев, В.А. Исследование микробного фона ран в зависимости от времени года, локализации и фазы заживления/В.А. Ермолаев, P.M. Юсупов//Материалы международного симпозиума «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний». -Казань, 2005. -С. 458 -46.

    Ермолаев, В.А., Никулина Е.Н. Динамика морфологических показателей крови бычков с гнойными ранами//Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана. Казань, 2010. Т. 203. С. 109-114.

    Ермолаев, В.А., Никулина Е.Н. Динамика морфологических показателей крови телят с гнойными ранами / В.А. Ермолаев, Е.Н. Никулина // Материалы Международной научно-практической конференции «Кадровое и научное обеспечение инновационного развития отрасли животноводства»// Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – Казань, 2010. – Т. 203. – С. 109-114.

    Ляшенко, П.М. Влияние гидрофильных мазей на гемостазиологические показатели плазмы крови у телят с гнойными ранами/П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев//Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения Материалы V Международной научно-практической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. -С. 104-107.

    Ляшенко, Павел Михайлович. Лечение гнойно-некротических поражений пальцев у коров препаратом «гипофаевип» и корректорами системы гемостаза : дис. … канд. ветеринарных наук: 16.00.05/ П.М. Ляшенко. -Оренбург, 2006. — 197 с.

    Марьин, Е.М. Болезни копытец у коров различных пород / Е.М. Марьин, В.А Ермолаев // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. — 2011. — Т. 2. № 30-1. — С. 104-105.

    Марьин, Е.М. Природные сорбенты в лечении гнойных ран у животных: монография/ Е. М. Марьин, В. А. Ермолаев, О. Н. Марьина. — Ульяновск: УГСХА, 2010. – 141 с.

    Никулина, Е.Н. Динамика гематологических показателей при лечении гнойных ран у телят / Е.Н. Никулина, П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Материалы Международной научно-практической конференции. ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ». – Саратов: ИЦ «Наука», 2010. – С. 315-317.

    Никулина, Е.Н. Динамика изменения гемостазиологических показателей при лечении гнойных ран у телят/ Е.Н. Никулина, В.А. Ермолаев, П.М. Ляшенко//Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2012. Т. 4. № 36-1. С. 78-79.

    Никулина, Е.Н. Морфогистологические изменения тканей при лечении гнойных ран гидрофильными мазями в сравнительном аспекте/Е.Н. Никулина, П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев//Известия Оренбургского государственного аграрного университета. -2011. -Т.3. № 31-1. -С. 113-114.

    Сапожников, А.В. Клинико-морфологические показатели крови при лечении ран светодиодным излучением красного диапазона/А.В. Сапожников, И.С. Сухина, В.А. Ермолаев//«Молодёжь и наука XXI века»: Материалы II Открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных. -Ульяновск: УГСХА, 2007. -Часть 1. -С.148-151.

    Семенов Б.С. Практикум по оперативной хирургии животных с основами топографической анатомии домашних животных (учебники и учебные пособия для высших учебных заведений) / Б. С. Семенов, В.А. Ермолаев, С.В. Тимофеев. — Москва: КолосС, 2003. — 263 с.

    Семенов Б.С. Практикум по оперативной хирургии животных с основами топографической анатомии домашних животных (учебники и учебные пособия для высших учебных заведений) / Б. С. Семенов, В.А. Ермолаев, С.В. Тимофеев. — Москва: КолосС, 2006. — 263 с.

    Тимофеев С.В. Общая хирургия животных. Учебник для вузов/ С.В. Тимофеев, Ю.И. Филиппов, С.Ю. Концевая, С.В. Позябин, П.А. Солдатов, С.М. Панинский, Д.А. Дервишов, Н.П. Лысенко, В.А. Ермолаев, М.Ш. Шакуров, В.А. Черванёв, Л.Д. Трояновская, А.А. Стекольников, Б.С. Семёнов. – М.: ООО «Зоомедлид», 2007. — 670 с.

    Хирургические болезни конечностей у молочных коров / Б.С. Семёнов, В.Н. Виденин, Н.В. Пилаева, Г.Ю. Савина // Вопросы нормативно- правового регулирования в ветеринарии. – 2013. — № -3. – С. 107 – 109.

    Чеходариди, Ф.Н. Патогенетическая терапия инфицированных ран у крупного рогатого скота/ Ф.Н. Чеходариди, С.Г. Гадзаонов, М.С. Гугкаева//Вестник ветеринарии. -2008.- Т. 46. № 3.-С. 45-48.

    Экономические затраты различных способов лечения инфицированных кожно-мышечных ран у собак / Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, О.Н. Марьина, П.М. Ляшенко // Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». — Ульяновск: УГСХА, 2009. — С. 66-67.

    Очень часто при посещении ветеринарной клиники владельцу заболевшего животного ветеринарный врач предлагает сдать кровь собаки для общего клинического анализа.

    Взятие крови для этого исследования происходит в специальную пробирку с веществом, препятствующим свертыванию крови. Если произойдёт свертывание крови, то не удастся провести данный анализ. Собаку необязательно выдерживать перед взятием крови на голодной диете.

    При сборе анализа собака фиксируется в положении лежа на боку или на животе или стоя, в зависимости от выбора вены, из которой будет проводиться сбор анализа. Жгутом зажимается лапа выше места инъекции, шерсть с поверхности вены может быть сострижена и место введения иглы обрабатывается спиртовым раствором.

    Общий объем крови для ОКА обычно составляет 1-3 мл. Ран на месте инъекции не остается и поэтому данная процедура не опасна для собаки.

    Нормы показателей крови варьируются в зависимости от лаборатории, куда сдавался анализ, ее технического оснащения. Обычно, нормы и конкретные данные по исследованию показателей крови для собак прилагаются на специальном бланке для расшифровки.

    Рассмотрим показатели ОКА крови по отдельности:

    • Гемоглобин — это сложный железосодержащий белок, который содержится в эритроцитах. Чаще всего его показатели важны для диагностики анемий у животных.
    • Эритроциты (RBC) — это красные кровяные тела, количество которых исследуется также для диагностики анемий у животных.
    • Гематокрит (Ht) – это соотношение объема эритроцитов к объему жидкой части крови. С помощью данного показателя принимается решение о переливании крови, оценивается степень обезвоживания у животного, анемия.
    • Тромбоциты (Pl) — это мелкие плоские бесцветные клетки крови, основной функцией которых является участие в процессах свертывания. Уровень тромбоцитов исследуется для исключения проблем со свертываемостью крови у животных.
    • Лейкоциты (WBC) – это белые клетки крови, выполняющие защитные функции. К лейкоцитам относят нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты, моноциты. Повышение общего числа лейкоцитов в анализе крови – говорит о лейкоцитозе, который отмечается при общем воспалении в организме. Когда лейкоциты понижены, говорят о лейкопении.
    • СОЭ – скорость оседания эритроцитов. СОЭ также используется как дополнительный показатель воспалительного процесса в организме собаки, но этот показатель имеет ограниченное диагностическое значение.
    • Палочкоядерные нейтрофилы — этот тип лейкоцитов, достаточно недолго существующих в организме – молодые (незрелые) формы лейкоцитов. Их высокое количество наряду с лейкоцитозом может указывать на острый воспалительный процесс (случившийся недавно и развивающийся быстро).
    • Сегментоядерные нейтрофилы. Эти клетки – самая зрелая стадия нейтрофилов. По их количеству судят о длительности воспалительного процесса, тяжести инфекционной болезни.
    • Базофилы. Эти клетки активно участвуют в фагоцитозе при аллергических реакциях и при инфекционных болезнях.
    • Моноциты — это клетки макрофаги, главной функцией которых является фагоцитоз. Их количество повышается при проникновении инфекции в организм. Моноциты участвуют в стимуляции иммунной системы и осуществляют противоопухолевый, противопаразитарный, противомикробный иммунитет. Опираясь на общее количество моноцитов можно оценить реакцию организма на инфекционное заболевание.
    • Лимфоциты. Эти клетки обеспечивают иммунную защиту в организме. Увеличение общего количества лимфоцитов происходит при острой и хронической инфекции, а также может быть симптомом лимфомы у собаки.
    • Эозинофилы. Чаще всего эозинофилы являются маркером аллергических заболеваний или паразитарной инвазии у собак.
    • Надо запомнить, что получив результат по общему клиническому анализу крови в ветеринарной лаборатории, необходимо посетить ветеринарного врача, который расшифрует данные и назначит лечение животному и даст необходимые рекомендации.

      Статью подготовил ветеринарный врач Шалдин Н.Н.

      ЗАНЯТИЕ 17. Получение крови, определение скорости оседания эритроцитов и ретракции кровяного сгустка

      Место проведения занятия—клиника и лаборатория.

      Овладеть техникой взятия крови у животных.

      Научиться определять скорость оседания эритроцитов и ретракцию кровяного сгустка.

      Показатели СОЭ у разных видов животных и отклонения.

      Показатели индекса ретракции кровяного сгустка у лошади и крупного рогатого скота и при патологии.

      Для получения большого количества крови её берут у КРС, овец, коз, лошадей из яремной вены с помощью кровопускательных игл, у свиней—из хвоста, хвостовой артерии и крониальной полой вены.

      Небольшое количество крови можно получить у животных из кровеносных сосудов уха, у кур—из гребня или серёжек.

      Определение скорости оседания эритроцитов

      В эритроседиометр отвешивается 0,04 г натрия цитрата в порошке, затем набирают в него крови до «0» из яремной вены (предварительно подготовив поле). Осторожно переворачивают эритроседиометр до полного растворения порошка. Если крови больше «0», то излишек отсасывают пипеткой. Установив пробирку в штатив, наблюдают за ходом реакции через каждые 15 минут в течение часа, затем отмечают через 24 часа.

      В капилляр, после промывания свежеприготовленным 5 % раствором лимоннокислого натрия, набирают того же раствора до метки Р или до деления 50 и выпускают на часовое стекло или в пробирку, затем дважды набирают кровь до метки «К» или дел. 100 и выпускают на то же часовое стекло или в пробирку, смешивают и смесь набирают без пузырьков воздуха в другой, промытый лимоннокислым натрием, капилляр, который устанавливают в штатив и наблюдают за ходом реакции. Учитывают СОЭ через 1 час и выражают в миллиметрах.

      У здоровых животных показатели за час составляют: у КРС—0,5—1,5; у овец—0,5—1,0; у лошадей—40—70; у свиней—2—9; у собак—2—6; у кур—2—3 мм.

      Определение ретракции кровяного сгустка

      по П. В. Каймакову

      Кровь в количестве 10 мл набирают в хорошо вымытую и очищенную спиртом и эфиром сухую пробирку и отстаивают 24 часа при комнатной температуре.

      По истечении 24 часов отстоявшуюся сыворотку отсасывают пипеткой и измеряют её количество в мерной пробирке, после чего определяют индекс ретракции (И.Р.) путём деления количества сыворотки на первоначальный объём крови.

      Пример: крови взято 10 мл, а сыворотки 5 мл

      И. Р. 10 = 0,5

      И. Р. у лошади колеблется от 0,3 до 0,7 в среднем—0,53

      У КРС равен 0,4—0,6.

      Показатели скорости оседания эритроцитов:

      Индекс ретракции кровяного сгустка

      Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные

      Пробирки Неводова или эритроседиометры

      5 % раствор натрия цитрата

      Пробирки диаметром 1,5 см

      Иглы для взятия крови

      Таблицы с показателями СОЭ и ИР у животных

      Животные: КРС, лошади, поросята

      VIII. Оценка выполненной работы студента преподавателем.

      ЗАНЯТИЕ 18. Подсчёт количества эритроцитов, определение гемоглобина в крови и цветового показателя

      Место проведения занятия—клиника, лаборатория.

      Цель занятия—освоить методики подсчёта эритроцитов и определения гемоглобина.

      Текущий опрос студентов по следующим вопросам:

      Показатели эритроцитов и гемоглобина у разных видов животных.

      Их отклонения при различных физиологических и патологических состояниях.

      Выполнение работы студентами.

      Подсчёт количества эритроцитов.

      Кровь набирают в смеситель до метки 0,5 или 1. Конец меланжера обтирают от крови, затем в капилляр до метки 101 набирают физиологический раствор. Получается разведение в 200 или 100 раз. Когда смеситель наполнен кровью и физиологическим раствором, концы его зажимают между большим и указательным пальцами и несколько раз энергично встряхивают.

      Перед заряжением камеры содержимое смесителя вновь тщательно перемешивается и вводится под покровное стекло. Чтобы высота камеры не изменялась, необходимо покровное стекло плотно протереть до образования т.н. ньютоновских колец.

      Заряженная камера помещается под микроскоп без иммерсии. Подсчёт эритроцитов начинают с квадрата, расположенного в левом углу, затем переходят к другим квадратам.

      Подсчитывать нужно в 5 больших квадратах все эритроциты, лежащие внутри квадрата, и на его внутренних линиях.

      Подсчитанные эритроциты в пяти больших квадратах суммируют и определяют содержание количества эритроцитов в 1 куб. мм. крови по следующей формуле: М . 4 000 . у

      Количество эритроцитов Х равно количеству подсчитанных клеток в пяти больших квадратах М. умноженному на 4 000 и степень разведения у, разделённому на 80 (число малых квадратиков).

      Объём одного малого квадратика равен 1\ 4 000 куб. м., а поэтому, чтобы получить количество в 1 куб. мм. необходимо число эритроцитов умножить на 4 000.

      Расчёт нужно производить следующим образом: количество эритроцитов в 5 квадратах умножается на 10 000 при разведении на 200 и

      на 5 000 при разведении на 100.

      Пробирочный метод подсчёта эритроцитов.

      В чистую пробирку Флоринского наливают 4 мл физраствора. Кровь набирают в пипетку от гемометра Сали 0,02 мл, осторожно выдувают в пробирку с физраствором, промывают пипетку , закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Разведение 1:200.

      Кровь, взятую в пробирку перед заполнением камеры, встряхивают несколько раз. Камеру заполняют с помощью пастеровской пипетки или концом круглой стеклянной палочки, важно, чтобы вся поверхность, на которой нанесена сетка, была заполнена жидкостью. Расчёт производят обычным способом с учётом разведения.

      В связи с переходом к применению в клинической лабораторной диагностике Международной системы единиц СИ в практикуме наряду со старыми физическими единицами приведены также новые единицы. Например: вместо выражения количества эритроцитов в млн/мкл и лейкоцитов в тыс/мкл число эритроцитов следует обозначать в 10 12 л, а лейкоцитов—в 10 9 л.

      Количество эритроцитов у взрослых здоровых животных в млн/мкл или 10 12 л ;

      КРС 4,5—7,5; овцы—7,6—11,2; лошади—5,5—9,0; свиньи—4,0—7,5; собаки—5,2–8,4; куры—2,5–5,0.

      Определение гемоглобина. Способ Сали

      В градуированную пробирку при помощи пипетки отмеряют до 10-го деления или до круговой метки с цифрой 2 гр проц. децинормального раствора соляной кислоты. В капилляр до 20 мм набирают кровь и осторожно, очистив конец капилляра переносят кровь в пробирку с децинормальным раствором НСl, чтобы на стенках капилляра не осталось следов крови, ещё раза три споласкивают той же кислотой стараясь не пенить жидкость.

      Кровь гемолизируется и образуется соляно-кислый гематин.

      Спустя 5-7 минут в пробирку добавляют дистиллированной воды. Доводя окраску до стандарта.

      Цифра, соответствующая уровню жидкости по нижнему мениску в пробирке, показывает количество гемоглобина по Сали или г\100 мл.

      Определение цветового показателя

      Цветовой показатель вычисляется по формуле:

      Цп =

      где ЦП—цветовой показатель;

      Н1—среднее количество гемоглобина в норме, г в 100 мл (или г \ л);

      Н2—количество гемоглобина у исследуемого животного, г в 100 мл (или г \л );

      Е1—среднее количество эритроцитов в норме млн \ мкл (или 10 12 \л);

      Е2—количество эритроцитов у исследуемого животного, мдн\мкл

      Цветовой показатель крови у здоровых животных составляет: у КРС-0,7—1,1; у овец—0,5—0,7; у лошадей—0,8—1,2 у свиней—0,8—1,0; у собак—0,8—1,2; у кур—2—3.

      Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные.

      Счётная камера Горяева.

      Смеситель для эритроцитов.

      Децинормальный раствор соляной кислоты.

      Пипетки градуированные на 1 и 5 мл, пипетки от гемометра Сали.

      Таблицы с показателями эритроцитов и гемоглобина у животных.

      Животные: КРС, лошади, поросят.

      ЗАНЯТИЕ 19. Подсчёт количества лейкоцитов. Приготовление и окраска мазков. Выведение гемограммы, гематологического и лейкоцитарного профиля

      Место проведения занятия—клиника и лаборатория кафедры.

      Освоить методику подсчёта лейкоцитов.

      Приобрести навыки приготовления и окраски мазков.

      Вывести лейкоцитарные формулы разных видов животных.

      Определить лейкоцитарный профиль у крупного рогатого скота.

      Показатели лейкоцитов у разных видов животных.

      Их изменения в зависимости от некоторых физиологических и патологических состояний.

      Понятие о лейкоцитарной формуле и лейкоцитарном профиле.

      Показатели лейкоцитарной формулы у крупного рогатого скота и лошадей.

      Морфологические изменения лейкоцитов.

      Объяснение методики выполнения работы преподавателем.

      Подсчёт количества лейкоцитов.

      Кровь набирают в смеситель или меланжер до черты 0,5 или 1 ( из уха или цитратной крови). Затем в этот же меланжер набирают 2% раствор уксусной кислоты до метки 11, получается разведение в 20 раз. После тщательно перемешивают, первые две капли удаляют из смесителя и каплю средней величины вводят под покровное стекло к камере (ранее притёртое). Критерием притёртости стекла к камере служит образование ньютоновских колец. Правило подсчёта—заряженная камера помещается под микроскоп без иммерсии. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах (т.е. 1600 малых). Допустимо считать 75 больших квадратов (т.е. 1200 малых).

      Формула для подсчёта: Х =

      где Х—искомое количество форменных элементов в 1 м 3 ;

      а—сумма форменных элементов, сосчитанных в определённом объёме камеры;

      б—количество сосчитанных малых квадратов;

      Объём малого квадрата равен 1\100 мм 3 , то в 1 мм 3 крови их будет в 400 раз больше.

      Пример: (разведение крови в 20 раз).

      В 1600 малых квадратах (т. е. 100 больших) сосчитано 150 лейкоцитов, тогда в 1 м 3 будет:

      150 х 4000 х 20

      1600 = 150 х 50 = 7500

      т.е. сумму лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах, надо умножать на 50.

      Подсчёт лейкоцитов (пробирочный метод)

      В чистую пробирку отмеривают пипеткой 0,4 мл раствора уксусной кислоты. Кровь набирают пипеткой от гемометра Сали-0,02 мл и осторожно переносят её в пробирку с 3 % уксусной кислотой. Разведение 1:20. Камеру заполняют с помощью пастеровской или концом круглой стеклянной палочки, важно, чтобы вся поверхность сетки была заполнена жидкостью. Расчёт производят обычным способом с учётом разведения.

      Количество лейкоцитов у взрослых здоровых животных (тыс.\мкл или 10 9 \л); у КРС—6,5—9,5; у овец—6,6—10,6; у лошадей—7,0—12,0; у свиней—6,7—23,0; у собак—8,5—10,5; у кур—20,0—40,0.

      Выведение лейкоцитарной формулы.

      Подсчёт отдельных классов лейкоцитов ведётся под микроскопом с иммерсией. Всего в мазке должно быть подсчитано не менее 100 клеток, лучше 200. Существуют методы подсчёта по Меандру—4-х полюсный и по Мухину (три линии перпендикулярные мазку в его центре).

      Лейкограмма крови здоровых животных, %

      Нейтрофилы

      Животные Б Э М Ю П С Л М

      Определение лейкоцитарного профиля.

      Лейкоциты подсчитываются по классам на базе 100 клеток, выводится лейкоцитарная формула, после чего производится перерасчёт по количеству лейкоцитов в мм 3 .

      Пример: если на 100 сосчитанных клеток приходится 60 лимфоцитов, а общее количество лейкоцитов в 1 мм 3 равно 10 000, то по формуле:

      100—60 10 000 х 60

      10 000— Х Х = 100 = 6 000

      Затем пересчитываются другие классы.

      Полученные данные отмечают точкой в соответствующей графе специального бланка.

      Соединив точки линией, получают графическое изображение—лейкоцитарный профиль. Он даёт возможность определить какой лейкоцитоз у животного относительный или абсолютный.

      Показатели лейкоцитарной формулы и патологические

      I. Лейкоциты (тыс.\ мкл.):

      Определение лейкоцитарного профиля.

      Определение гематологического профиля

      Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные:

      Счётная камера Горяева

      Меланжеры для лейкоцитов

      Шлифованное покровное стекло.

      2—3 % раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синькой.

      Пробирки лабораторные с резиновыми пробками

      Пипетки градуированные на 1 и 5

      Пипетки от гемометра Сали

      Предметное стекло (чистые, обезжиренные)

      Таблицы с показателями лейкоцитарной формулы, лейкоцитарного и гематологического профиля.

      VIII. Оценка работы студента преподавателем.

      ЗАНЯТИЕ 20. Определение общего кальция и неорганического фосфора в сыворотке крови

      Место проведения занятия—лаборатория кафедры.

      Цель занятия—научиться определять в сыворотке крови количество кальция и неорганического фосфора и давать клиническую оценку результатам исследования.

      Физиологическая роль кальция в организме животного.

      Показатели общего кальция в сыворотке крови у различных видов сельскохозяйственных животных и их изменения.

      Физиологическая роль фосфора в организме животных.

      Показатели неорганического фосфора в сыворотке крови у сельскохозяйственных животных и их изменения

      Определение кальция в сыворотке крови по методу де-Варда.

      В одну маленькую центрифужную пробирку помещают 0,5 мл сыворотки крови, в другую—0,5 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,5 мл насыщенного водного раствора щавелевокислого аммония.

      Через 30 минут пробирки центрифугируют в течение 15 минут. Сыворотку отсасывают, к осадку добавляют 1—2 мл дистиллированной воды и вновь центрифугируют 3—5 минут.

      После этого жидкость отсасывают, к осадку приливают 0,3 мл серной кислоты в разведении 1: 2 с водой. Смесь нагревают на водяной бане до 50—65% и титруют сантинормальным раствором перманганата (КМпО4) до появления розового окрашивания, сохраняющегося в течение 2 минут.

      Количество кальция в миллиграммах-процентах вычисляют по формуле: ( а — к ) х 2 х 0,2 х 100, где

      а — количество сантинормального раствора перманганата, израсходованного на титрование сыворотки;

      к — количество перманганата, израсходованного для контрольной титрации дистиллированной воды;

      0,2 — количество кальция в миллиграммах, соответствующее 1 мл сантинормального раствора перманганата;

      2 — множитель для вычисления количества кальция в 1 мл сыворотки крови;

      100 — множитель для вычисления количества кальция в миллиграмм-процентах в 100 мл сыворотки крови.

      Количество общего кальция (мг на 100 мл) у КРС 10,1—12,5; у лошадей—12,0—15,щ; у свиней—10,5—12,5; у птиц—11,0—15,0.

      Определение неорганического фосфора в сыворотке крови

      по Аммону и Гинсбергу (в модификации С.А. Ивановского).

      В центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды, 1 мл исследуемой сыворотки и 1 мл 20 % раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают. Через 5 минут центрифугируют при 3 000 об\мин. в течение 15 мин. (или фильтруют через бензольный фильтр). Затем в пробирку наливают 2,5 мл прозрачного центрифугата (или фильтрата), 0,5 молибденового реактива, 1 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 6 мл дистиллированной воды. Одновременно в другую пробирку (стандарт) вносят 3 мл рабочего стандартного раствора фосфора, 0,5 мл молибденового реактива, 1 мл 1 % раствора аскорбиновой кислоты и 5,5 мл дистиллированной воды. Через 10 минут жидкости в обеих пробирках колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зелёном светофильтре в кюветах шириной 10 мм.

      Расчёт производят по формуле:

      Ех х 0,05 х 100 Ех х 10

      Х = Ек х 0,5 Ек , где

      Х — количество неорганического фосфора в исследуемой сыворотке крови, мг в 100 мл;

      Ех — оптическая плотность пробы с центрифугатом сыворотки;

      Ек — оптическая плотность пробы со стандартным раствором фосфора (стандарт);

      0,05 — количество фосфора во взятом для анализа объёме рабочего стандартного раствора фосфора, мг; 100—коэффициент для перечисления количества фосфора на 100 мл сыворотки крови.

      В сыворотке крови взрослых животных в норме содержится следующее количество неорганического фосфора (мг на 100 мл); у КРС—5,0—6,5; у свиней—7,7—9,5; у лошадей—5,1—6,0; у птицы—5,6—8,0; у овец—4,5—7,5.

      Количество кальция (мг %).

      Количество неорганического фосфора (мг. %).

      Учебное оборудование, демонстрационный материал.

      Реактивы: насыщенный водный раствор щавелевокислого аммония,

      сантинормальный раствор перманганата калия, серная кислота в разведении 1:2, 20 % раствор трихлоруксусной кислоты; молибденовый реактив (готовят смешиванием раствора, состоящего из 5 г молибдата аммония и 60 мл дистиллированной воды, с раствором, приготовленным из 15 мл концентрированной Н2 SO4 и 25 мл дистиллированной воды); 1% раствор аскорбиновой кислоты на 0,1 н растворе НСl; основной стандартный раствор фосфора (4,394 г КН 2 РО 4 ) высушенного до постоянной массы над НSO в эксикаторе и дистиллированной воды до 1 л); рабочий стандартный раствор фосфора (2 мл основного раствора и дистиллированной воды до 100 мл + 20 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты; в 3 мл раствора содержится 0,5мг фосфора; вода дистиллированная).

      Оценка работы студента преподавателем.

      ЗАНЯТИЕ 21. Определение кислотной ёмкости и каротина в сыворотке крови

      Овладеть методикой исследования кислотной ёмкости крови.

      Научиться определять каротин в сыворотке крови и давать диагностическую оценку результатам анализов.

      Что такое кислотная ёмкость и нормальные показатели кислотной ёмкости у различных видов сельскохозяйственных животных.

      Виды нарушений кислотно-щелочного равновесия.

      Физиологическая роль каротина, содержание его у животных в норме и при патологии.

      Определение резервной щёлочности сыворотки крови

      по И.П. Кондрахину.

      Посуда: спаренные колбы, пипетки.

      0,01 н раствор NаОН (едкий натр);

      5% раствор Н2SО4;

      1 % спиртовой раствор фенолфталеина;

      0,01 н раствор Н2SО4 (серной кислоты).

      Ход исследования. В одну половину колбы вносят 0,5 мл сыворотки (или плазмы крови), причём выдувание остатков жидкости из пипетки не допускается, плотно закрывают пробкой. Во вторую половину колбы берут 2 мл 0,01 н раствора едкого натра и закрывают пробкой. Затем открывают первую половину колбы и к находящейся там сыворотке крови добавляют 1 мл 5 % раствора серной кислоты и быстро закрывают пробкой. Вращательными движениями тщательно смешивают сыворотку с кислотой. За время прохождения реакции смешивание повторяют 3—4 раза.

      В контрольную пробирку вносят 2 мл 0,01 н раствора едкого натра и плотно закрывают пробкой. Во вторую половину спаренной колбы берут 1 мл 5% раствора серной кислоты и закрывают пробкой. Перед закрытием отверстий колбы пробки увлажняют дистиллированной водой.

      Для большей точности каждый образец сыворотки исследуют в двух спаренных колбах. Контрольный опыт проводят в трёх сдвоенных колбах.

      Через 4—6 ч (допустимо до 12 ч.) открывают колбы. В которых находится раствор едкого натра, вносят одну каплю 1 % спиртового раствора фенолфталеина. Смешивают (появляется красная окраска). Затем жидкость в колбе титруют 0,01 н раствором серной кислоты до полного обесцвечивания, что происходит при рН 8.Титрование следует проводить осторожно и с одинаковой быстротой во всех пробах и контроле.

      Расчёт проводят по формуле:

      Х = ( а — 6 ) х 0,224 х 200 = ( а — 6 ) х 44,8

      где: Х—резервная щёлочность (в объёмных процентах) СО;

      а—количество 0,01 н раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл;

      б—количество 0,01 н раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл;

      0,224—фактор пересчёта 0,01 н раствора серной кислоты на СО при данной реакции;

      200—коэффициент для пересчёта взятого для анализа количества сыворотки (плазмы) крови (0,5 мл на 100 мл.)

      Нормальные показатели кислотной емкости крови (мг в 100 мл); КРС—460—540, овцы—460—540, козы—380—520, лошади—500—600, свинья—500—600, собаки—450—550.

      Определение каротина в сыворотке крови

      (по В.Ф. Коромыслову и Л.А.Кудрявцевой)

      В пробирку вносят 1 мл сыворотки крови и 3 мл 95 % этилового спирта, тщательно смешивают стеклянной палочкой, добавляют 6 мл петролейного эфира, энергично встряхивают в течение 2 минут и осторожно по стенке пробирки приливают 0,5 мл дистиллированной воды, оставляют стоять до чёткого разделения водной и органической фаз. После этого осторожно сливают 4,5 мл экстракта каротина и переносят в кювету.

      Колориметрируют на фотоэлектроколориметре в кюветах 1см при синем светофильтре против петролейного эфира (бензина). Одновременно колориметрируют рабочий стандартный раствор бихромата калия (5 мл дистиллированной воды смешивают с 5 мл основного бихромата калия).

      Расчёт делают по формуле: А

      Х = х 1,248.

      где: Х—количество каротина в сыворотке, мг на 100 мл;

      А—оптическая плотность исследуемой пробы;

      Б—оптическая плотность рабочего стандартного раствора

      1,248—коэффициент для перечисления каротина в мг на 100 мл сыворотки крови.

      Содержание каротина в сыворотке крови здоровых животных составляет (мг на 100 мл); у КРС—0,5—2; у овец—0—0,02; у свиней— 0—0,01; у лошадей—0,02—0,175.

      1. Показатели кислотной ёмкости сыворотки крови.

      Содержание каротина в сыворотке крови.

      0,5 % раствор химически чистого хлорида натрия, приготовленного на нейтральной бидистиллированной воде.

      Сантинормальный раствор соляной кислоты.

      Индикатор—1% водный раствор краски ализаринрот.

      Рабочий стандартный раствор бихромата калия.

      Сыворотка крови от различных животных

      Всю используемую при анализах посуду для нейтрализации предварительно обрабатывают хромовой смесью.

      ЗАНЯТИЕ 22. Определение билирубина и общего белка

      в сыворотке крови

      Цель занятия—научиться определять в сыворотке крови билирубин, общий белок и давать клиническую оценку результатам исследования.

      Значение исследования сыворотки крови на содержание в ней билирубина для дифференциации различных форм желтух.

      Показатели общего белка сыворотки крови у здоровых животных и их изменения.

      Объяснение методики выполнения работы преподавателем

      Качественное определение билирубина в сыворотке крови

      Берут 2 маленькие пробки. В первую вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки и добавляют 0,3 мл смеси диазореактивов; во вторую—0,5 сыворотки, 0,5 мл 96 0 спирта и 0,3 мл смеси диазореактивов (спирт во вторую пробирку добавляют для разрушения связи непрямого билирубина с глобулином крови).

      Содержимое пробирки размешивают тонкой чистой палочкой. Розовое окрашивание в первой пробирке указывает на прямую, во второй пробирке—на непрямую реакцию.

      Количественное определение (по Бокальчуку)

      Для кратных разведений сыворотки берут 6 маленьких пробирок и наливают в каждую, за исключением первой, по 0,5 мл физиологического раствора поваренной соли, потом вносят по 0,5 мл исследуемой сыворотки в первую и вторую пробирки.

      Сыворотку во второй пробирке тщательно смешивают с физиологическим раствором, после чего 0,5 мл смеси переносят в третью пробирку и также тщательно смешивают, 0,5 мл смеси из третьей пробирки переносят в четвёртую пробирку и т.д. Остаток (0,5 мл) из последней пробирки выливают в полоскательную чашку. В результате получают разведения:

      № пробирки 1 2 3 4 5 6

      Степень разведения 1 2 4 8 16 32

      Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл абсолютного (или 96 град. спирта), встряхивают и получают взвесь белка в спиртовой вытяжке билирубина. В жидкость, помутневшую вследствие осаждения белка, наливают по 0,5 мл смеси диазореактивов, стеклянной палочкой осторожно перемешивают содержимое пробирок. В результате реакции сыворотка принимает розовое окрашивание. Концом реакции считают разведение, которое даёт едва различимое розовое окрашивание. Умножив степень разве

      дения на 0,016, устанавливают количество билирубина в 1 мл сыворотки крови, а умножив её на 100—количество билирубина в миллиграмм % в 100 мл сыворотки. В первой пробирке это количество будет составлять 1,6 мг %, во второй—3,2, в третьей—6,4, в четвёртой—12,8, в пятой—25,6 и в шестой—51,2 мг %.

      Определение билирубина в сыворотке крови (по Казакову)

      Восемь чистых и сухих пробирок устанавливают в штативе. Затем в каждую пробирку вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки и смешивают содержимое. Из этой пробирки при помощи пипетки набирают 0,5 мл смеси и переносят во вторую пробирку, из второй 0,5 мл жидкости переносят в третью и т.д. Из последней (восьмой) пробирки 0,5 мл смеси удаляют в сливательницу. Таким образом получают разведения сыворотки, кратные двум. Затем в каждую пробирку вносят по 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты и тщательно встряхивают. После этого содержимое пробирок выливают в приготовленные заранее воронки из фильтровальной бумаги, на которых должны быть обозначения в соответствии с разведением крови. Воронки оставляют для высушивания при комнатной температуре. Учёт реакции производят на следующий день. Концом реакции считают разведения, при котором остаётся на фильтре хорошо различимое зелёное окрашивание.

      Для расчёта можно пользоваться таблицей.

      № пробирки Степень разведения Количество билирубина