Рид коров

сельского хозяйства СССР

29 декабря 1984 года

ПО БОРЬБЕ С ЛЕЙКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

1. Общие положения

1.1. Лейкоз крупного рогатого скота — хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы. Заболевание протекает бессимптомно или проявляется лимфоцитозом и злокачественными образованиями в кроветворных и других органах и тканях.

Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов, но клинические и гематологические изменения чаще обнаруживаются у животных с 4-летнего возраста.

Возникновение и развитие болезни обусловлены вирусом лейкоза крупного рогатого скота, генетической предрасположенностью и иммунологической недостаточностью организма.

1.2. Диагноз на лейкоз считают установленным при обнаружении у крупного рогатого скота клинических признаков или гематологических или патологоанатомических и патологогистологических изменений, характерных для этой болезни, и выявлении специфических антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в крови животных.

1.3. Отбор, доставку проб в лабораторию, их исследование и оценку результатов проводят в соответствии с действующими методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота.

1.4. Мероприятия по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота включают:

постоянный клинический контроль за состоянием животных (стад);

проведение в случае подозрения на заболевание гематологических и серологических (РИД) исследований животных;

комплекс ветеринарно-санитарных, зоогигиенических, селекционно -генетических и организационно-хозяйственных мер, направленных на повышение общей резистентности организма животных;

предубойный осмотр животных с обязательным гистологическим исследованием органов животных, у которых обнаружены клинические признаки, характерные для лейкоза;

обязательные серологические исследования по РИД всех животных, предназначенных для племенной продажи. Животные, давшие положительную реакцию по РИД, к выводу из хозяйства для использования при воспроизводстве не подлежат.

2. Мероприятия в хозяйствах, благополучных

по лейкозу крупного рогатого скота

2.1. В хозяйствах, благополучных по лейкозу крупного рогатого скота, их руководители и специалисты обязаны строго выполнять требования Ветеринарного устава Союза ССР по охране стад от заноса в них заразных болезней, в частности:

не допускать ввода (ввоза) в хозяйство (на отделения, фермы, предприятия) крупного рогатого скота из неблагополучных по лейкозу хозяйств;

содержать изолированно в течение 30 дней всех вновь поступивших в хозяйство животных. В период профилактического карантина исследовать сыворотки крови крупного рогатого скота в РИД на наличие антител к вирусу лейкоза. Оставлять в хозяйстве разрешается только РИД-отрицательных животных.

Читайте так же:

  • Сколько было коров у юсси За спичками Мосфильм, 1980 г. Вопрос: куда в шутку собрались уехать друзья Антти и Юсси? Ответ: в Америку. — Эй, постойте! Куда вы? — Скажи, что в Америку едем. — Юсси в Америку едет. А […]
  • Если у коровы гноятся глаза В соответствии с требованиями законодательства доступ к запрашиваемому Интернет-ресурсу закрыт. Интернет-ресурс запрещен к распространению судом и/или внесен в один из списков: Вы […]
  • Монгольский бык Пух тибетского яка Пух яка называют «новым кашемиром». Это достаточно редкий и дорогой материал, он ценится во всем мире. Як - крупный бык с длинной косматой шерстью, обитающий в […]
  • Теленок на дрожжах Это статья для журнала «Пропозиція Нова», опубликованная в номере 10/2012 Эту статью в формате .pdf можно скачать здесь (на украинском языке) «Метаболическое программирование телят» — […]
  • Племенные коровы тюмень Аннотация научной статьи по животноводству и молочному делу, автор научной работы — Свяженина М. А., Викулова Л. Н. Современное молочного скотоводство Тюменской области характеризуется […]
  • Приусадебное хозяйство коровы Издательство: Эксмо-Пресс Дата выхода: январь 2001 ISBN: 5-04-006479-9 Тираж: 10 100 экземпляров Объём: 175 страниц Размеры(В x Ш x Т), см: 22 x 17 x 1 Эта книга - […]

В случае выявления в этот период больных лейкозом животных с гистологическим подтверждением диагноза или серологически положительно реагирующих в РИД ветеринарный врач, обслуживающий хозяйство, сообщает об этом соответствующему племживобъединению и хозяйству-поставщику, а также главному ветеринарному врачу района (города).

Положительно реагирующих животных изолируют и не допускают к племенному использованию. Дальнейшее назначение таких животных определяют по согласованию с племживобъединением и хозяйством-поставщиком. Остальных животных этой группы содержат изолированно и подвергают через каждые 3 мес. серологическим исследованиям до получения двух подряд отрицательных результатов.

2.2. Крупный рогатый скот, предназначенный для использования в качестве доноров и продуцентов на биологических предприятиях (пунктах), разрешается приобретать только в благополучных по лейкозу хозяйствах по получении отрицательных результатов РИД при исследовании сывороток крови.

2.3. Быки-производители на племпредприятиях и в других хозяйствах подлежат исследованию на лейкоз по РИД не менее 2 раз в год.

2.4. Запрещается использовать при воспроизводстве стада сперму и эмбрионы, полученные от больных лейкозом (в том числе от положительно реагирующих в РИД ) быков-производителей и коров.

2.5. В случае обнаружения при ветеринарно-санитарной экспертизе на убойных предприятиях в тушах, органах и тканях убитых животных очаговых или диффузных опухолевых разрастаний, увеличения лимфатических узлов и селезенки ветеринарный врач мясокомбината (бойни, убойного пункта) обязан взять патологический материал, направить его для гистологического исследования в ветеринарную лабораторию и сообщить об этом главному ветеринарному врачу района (города) и ветеринарному специалисту, обслуживающему хозяйство, из которого поступили на убой животные.

3. Мероприятия в хозяйствах, неблагополучных по лейкозу

3.1. Хозяйство (отделение, ферму, предприятие), в котором выявлены больные лейкозом животные и диагноз подтвержден гистологическим методом, объявляют в установленном порядке неблагополучным по этой болезни, в нем вводят ограничения (согласно п. п. 3.2, 3.3, 3.4 и 3.5 настоящей Инструкции) и утверждают план его оздоровления. В плане предусматривают регулярные обследования животных, комплекс организационно-хозяйственных, селекционно -генетических, зоогигиенических и ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на ликвидацию заболевания, определяют сроки и лиц, ответственных за их выполнение.

3.2. В хозяйстве (на отделении, ферме, предприятии), неблагополучном по лейкозу крупного рогатого скота, запрещают:

перегруппировку животных без разрешения ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство;

продажу племенного молодняка, за исключением животных, указанных в разделе 4 настоящей Инструкции.

3.3. Больных лейкозом животных изолируют и сдают на убой. Телят, полученных от больных коров, и нетелей выращивают для убоя на мясо.

3.4. Молоко от коров (за исключением клинически больных) оздоравливаемого хозяйства (отделения, фермы) сдают на молокозавод и используют на общих основаниях. Молоко, предназначенное для выпойки телят, подвергают пастеризации при температуре 76 °С в течение 20 с.

Молоко от коров с клиническими признаками лейкоза подлежит кипячению и может быть использовано только внутри хозяйства для откорма животных.

3.5. Оздоровительные мероприятия по результатам серологического исследования осуществляют в зависимости от принятой в хозяйстве технологии ведения племенного молочного скотоводства, наличия животноводческих ферм, дворов, летних лагерей, прочих построек для содержания скота, а также организационно-хозяйственных условий в порядке, предусмотренном в подпунктах 3.5.1 — 3.12.

3.5.1. Всех находящихся в неблагополучных хозяйствах животных разделяют на группы:

первая — животные, в сыворотке крови которых не выявлено антител к вирусу лейкоза;

вторая — животные, в сыворотке крови которых обнаружены антитела к вирусу лейкоза.

3.5.2. Быков-производителей, коров и нетелей первой и второй групп размещают раздельно на различных формах.

3.5.3. Телят от животных обеих групп с 10-дневного до 6-месячного возраста содержат на изолированной ферме. В 6-месячном возрасте их исследуют серологическим методом. Телят, давших положительную РИД, направляют на ферму, где содержатся животные второй группы. Телят с отрицательной РИД переводят на специализированную ферму по изолированному выращиванию племенного и ремонтного молодняка.

3.5.4. Молодняк старше 6-месячного возраста первой группы размещают на специализированной ферме по изолированному выращиванию племенного и ремонтного молодняка.

3.5.5. Молодняк старше 6-месячного возраста второй группы исключают из племенного использования и выращивают на ферме, где содержатся животные с положительной серологической реакцией.

3.5.6. Животных первой группы исследуют серологическим методом с интервалом в 6 мес. После вывода всех реагирующих положительно животных и получении двух подряд отрицательных результатов по всей группе ферму считают благополучной по лейкозу.

Гематологические исследования поголовья этой группы не проводят.

3.5.7. Животных второй группы серологически не исследуют. В этой группе всех животных старше 2 лет исследуют гематологическим методом.

3.5.8. При отсутствии условий для проведения оздоровительных мероприятий, предусмотренных в пп . 3.5.1 и 3.5.2 настоящей Инструкции, мероприятия по борьбе с лейкозом осуществляют путем замены неблагополучного поголовья животными, не реагирующими в РИД.

3.5.8.1. В таком хозяйстве проводят поголовные серологические исследования 1 раз в год. Животных с положительной РИД подвергают гематологическим исследованиям 1 раз в год.

С больными животными поступают, как указано в п. 3.3, а с молодняком — согласно подпунктам 3.5.3 — 3.5.5 настоящей Инструкции.

3.5.9. Телок на специализированной ферме по изолированному выращиванию племенных и ремонтных животных исследуют в 12 мес., перед случкой и перед переводом в основное стадо.

Положительно реагирующих животных выводят из специализированной фермы, размещают на ферме (отделении), где находятся животные с положительной РИД.

3.6. На племпредприятиях быков-производителей, в сыворотке крови которых выявляют антитела к вирусу лейкоза крупного рогатого скота, переводят в отдельный блок. Сперму таких быков можно направлять только в неблагополучные хозяйства (см. подпункт 3.5.1) для осеменения коров и телок второй группы.

3.7. Больных лейкозом животных разрешается перевозить на мясокомбинаты железнодорожным, водным и автомобильным транспортом с обязательной отметкой в сопроводительных документах о том, что они больны этой болезнью.

3.8. Животных, больных лейкозом, подвергают убою на санитарной бойне. При ее отсутствии разрешается их убивать на общем конвейере после завершения убоя здоровых животных и удаления из зала всех полученных от них туш и других продуктов. При этом запрещают сбор крови, сыворотки крови, эндокринных и других органов животных для ветеринарных и медицинских целей.

Помещение и оборудование после убоя больных подвергают дезинфекции.

Все случаи выявления лейкоза, а также опухолей иного происхождения подлежат регистрации в журнале учета ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и субпродуктов в цехе первичной переработки скота и на санитарной бойне мясокомбината (форма N 36) с включением в отчет формы N 6-вет.

3.9. При ветеринарно-санитарной оценке туш, внутренних органов и других продуктов, полученных от убоя больных лейкозом животных, руководствуются действующими Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

3.10. Навоз и сточные воды утилизируют на общих основаниях.

3.11. В неблагополучных по лейкозу хозяйствах проводят дезинфекцию помещений и оборудования согласно действующей Инструкции по дезинфекции, дезинвазии , дезинсекции и дератизации.

3.12. Ограничения по лейкозу с хозяйства (отделения, фермы) снимают в установленном порядке после вывода последнего больного лейкозом животного и получения трех подряд с интервалом в 3 мес. отрицательных результатов при серологическом исследовании всего стада.

4. Требования при выводе животных из хозяйств

для племенных и производственных целей

4.1. Из благополучных хозяйств вывод молодняка крупного рогатого скота допускается при условии, что эти животные за 30 дней до вывода исследовались серологическим методом и являются свободными от антител к вирусу лейкоза.

4.2. Из неблагополучных хозяйств (отделений, ферм) вывод молодняка допускается в возрасте не моложе 12 мес. при условии, что он выращивался с соблюдением требований подпунктов 3.5.3 — 3.5.4 настоящей Инструкции и исследован на лейкоз серологическим методом с отрицательным результатом.

4.3. Телок, сыворотки крови которых положительно реагируют в РИД, разрешается продавать в неблагополучные товарные хозяйства для производственных целей.

С утверждением настоящей Инструкции утрачивает силу «Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозами крупного рогатого скота», утвержденная Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 14 ноября 1973 г., и циркулярное письмо Главного управления ветеринарии Минсельхоза СССР от 28 июня 1978 г. N 116-17 «О порядке реализации молодняка крупного рогатого скота из неблагополучных по лейкозам хозяйств».

Интернет архив законодательства СССР. Более 20000 нормативно-правовых актов.
СССР, Союз Советских Социалистических республик, Советская власть, законодательство СССР, Ленин, Сталин, Маленков, Хрущев, Брежнев, Андропов, Черненко, Горбачев, история СССР.

Н . В . Ковалюк , кандидат биологических наук зав. лабораторией биотехнологии СКНИИЖ, проректор Краснодарского регионального института агробизнеса
В . Ф . Сацук , кандидат сельскохозяйственных наук, директор ООО ИПСХП «Астер»
Е.В. Мачульская, младший научный сотрудник лаборатории биотехнологии СКНИИЖ

ДНК — обязательный компонент любого живого организма (исключение составляют лишь РНК- содержащие вирусы на определен­ных стадиях своего существования). У мыши и человека, кишечной палочки и слона ДНК ус­троена по одному принципу- это полимерная макромолекула, состоящая из звеньев — нук-леотидов. Нуклеотиды бывают 4 видов: А, Т, G и С. У всех живых существ A,T,G,C — нук­леотиды встречаются в составе ДНК, но в раз­личных комбинациях. Чем ближе друг к другу виды расположены на эволюционной лестни-це, тем сильнее похожи их последовательнос­ти ДНК, в то же время даже у представителей одной семьи можно найти такие участки ДНК, которые будут строго индивидуальны.

Использование этого биологического свойства легло в основу метода полиме-разной цепной реакции (ПЦР), который по оценке американского журнала «Science» является самым выдающимся открытием последних лет.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)_это метод копирования участка ДНК, с помощью которого в течение нескольких часов можно выделить и размножить определенную ин­дивидуальную последовательность ДНК в ко­личестве, превышающем исходное в 10 мил­лионов раз. Некоторые области применения ПЦР _ выявление вирусных и бактериальных патогенов и высокоэффективный анализ ва­риаций нуклеотидных последовательностей (В. И. Глазко и др., 2000; Р. А. Волкова и др., 2000; А. А. Приймак, 1995).

Лейкоз крупного рогатого скота — хрони­ческая инфекционная болезнь с длительным латентным периодом, поражающая органы кроветворной системы (А.П. Кузнецова, В.П. Смирнов 1998).

Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) является этиологическим фактором (первопричиной) лейкоза у коров, телят, реже у других животных: овец, коз и кроликов (Л. Б. Прохватилова и др., 2001; Н. В. Замараева, М. И. Гулюкин, Н. Н. Снежков, 1996; C.Olson et al., 1981). Имеются данные об эксперимен­тальном заражении обезьян (Н. М. McClure, М.Е. Killing, P.Ph. Custer, 1974). Передача ВЛК­РС восприимчивому крупному рогатому, скоту может осуществляться со всеми секретами и экскретами при попадании в них лимфоцитов, зараженных ВЛКРС. Установлено, что для эк­спериментального заражения телят достаточ­но ввести им внутрикожно 2500 лимфоцитов крови от зараженного животного (такое ко­личество лимфоцитов содержится примерно в 0,0005 мл цельной крови). Среди основных факторов, обуславливающих передачу вируса лейкоза, наибольшее значение имеет перенос возбудителя через кровь и препаратов из нее, при ветеринарных и зоотехнических обработ­ках, т.е. ятрогенный способ передачи инфек­ции (В. М. Авилов, В. М. Нахмансон, 1995).

В сперме инфицированных быков-произ­водителей ВЛКРС не выявлен. Не наблюдает­ся определенного влияния передачи ВЛКРС потомству от серопозитивных бы ков-произ­водителей при естественном оплодотворении серонегативных коров. Однако у быков с вос­палением генитальных органов в сперме могут быть л и м фо циты ,инфици ро ванные ВЛКРС.Э к-спериментальноустановлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфо­цитов на слизистую оболочку матки. Изучение возможности передачи вируса лейкоза при эмбриопересадках подтвердили отсутствие передачи ВЛКРС от коров доноров коровам-реципиентам через эмбрионы (Апалькин В.А., Гулюкин М.И., Петров Н.И., 2005).

Вирус лейкоза крупного рогатого скота относится к семейству ретро вирусов (в это же семейство входят родственные ВЛКРС вирусы Т -клеточного лимфолейкоза и ВИЧ). Ретрови-русным инфекциям свойственен ряд общих признаков: длительность инкубационного периода, хроническое или латентное течение, пожизненное вирусоносительство и строго ограниченный круг восприимчивых живот­ных (Б. Г. Орлянкин, 1996; П. Н. Смирнов, В. В. Храмцов, В. В. Смирнова, 2000).

Ретровирусы проникают в клетку, РНК ос­вобождается и превращается в двухцепочеч-ную ДНК — копию, которая встраивается как провирус в ДНК клетки хозяина (Б. Г. Орлян­кин, 1996). Встроенный в геном хозяина про­вирус остается не доступным для воздействия специфических антител и в организме на про­тяжении всей жизни животного.

В благоприятных условиях встроенный провирус формирует новые вирионы; кото­рые отпочковываются от клеточной мембраны для инфицирования новых клеток.

Для диагностики лейкоза применяют кли­нический, патологоанатомический, гистоло­гический, гематологический, серологический и молекулярно — биологический методы.

Всё разнообразие клинических призна­ков лейкоза можно подразделить на специ­фические и неспецифические. Большинство исследователей указывают на первичное по­явление неспецифических признаков, а затем появляются специфические, по которым мож­но поставить диагноз (Н. В. Румянцева, Т.М. Шатерникова, 1963; Г.А. Симонян, 1963; Э.М. Ным и др., 1970). По мере развития заболева­ния у отдельных животных развивается понижение реактивности, вялость. Сравнительно рано у больных лейкозом животных регис­трируют нарушение сердечно — сосудистой деятельности (глухие тоны сердца, иногда их раздвоенность), пульс слабого наполнения, возможна аритмия. К числу неспецифических признаков лейкоза относятся нерегулярная жвачка, поносы,’запоры.

Специфические клинические признаки характеризуются прогрессирующим увели­чением поверхностных (околоушных, подче­люстных, предл о паточных, коленной складки, надвыменных), а также внутренних лимфати­ческих узлов, экзофтальмии.(В. М. Лемеш и соавт., 1987). .

Гематологический метод позволят диа­гностировать лейкоз на более ранних ста­диях развития заболевания. Сущность его заключается в обнаружении в периферичес­кой крови повышенного числа лейкоцитов (в основном лимфоидного ряда), слабо диф­ференцированных клеток, а также полимор­фных, атипичных клеток кроветворных орга­нов (Б.Г. Панков,1980; М. И. Гулюкин и др., 1996). Для оценки результатов исследований в различных странах предложено несколь­ко вариантов «лейкозных ключей». В нашей стране в 1965 году был разработан отечест­венный «лейкозный ключ». Все димфоидные диагностические «ключи» основаны на коли­чественных показателях.

Заражение животных ВЛКРС сопровожда­ется выработкой антител к структурным бел­кам вируса. Антитела и вирус циркулируют в организме у зараженных животных на протя­жении всей жизни. Это позволяет применять серологические методы для диагностики ин­фекции, вызываемой этим вирусом (Т.С. К’ос-тенко и др., 1989; А.Г. Берзяк, B.C. Ковалючко, В;С. Гротевич, Л.И. Киричук, 1990).

Разработанная и широко применяе­мая в ветеринарных лабораториях стра­ны реакция иммунодиффузии в геле ага­ра ( РИД ) с использованием антигена ВЛ в настоящее время остается основным диагностическим методом , по результа­том которого проводят оздоровительные и профилактические мероприятия в не­благополучных по лейкозу хозяйствах . В действующих в настоящее время «Прави­лах по профилактике и борьбе с лейкозом КРС» приоритет отдается именно сероло­гическим исследованиям сыворотки кро­ви . По их результатам судят об инфици — рованности животных вирусом лейкоза . В зависимости от этого определяют мероп­риятия по оздоровлению .

Однако, как и любой диагностический метод, РИД не лишен недостатков.

Так, наличие у лейкоза латентной стадии, когда в крови отсутствуют антитела к вирусу) усложняет диагностику заболевания. Экспе­риментально установлено, что после зара­жения скрытый период инфекции (период от момента заражения до появления антител к вирусным антигенам) продолжается от 2 не­дель до нескольких месяцев, по этому, посте­пенно выводя из стада РИД

позитивных жи­вотных, теоретически возможно добиваться полного оздоровления хозяйства от лейкоза (A. Burny, Bruck С, Cleuter Y., 1985). Тем не менее, в оздоровленных стадах, не имевших контактов с другими, через несколько меся­цев или даже лет выделяют животных с анти­телами к ВЛКРС (В. М. Нахмансон, 1986) . Это можно объяснить характерным для лейкоза явлением иммунологической толерантности, когда наблюдают вирусоносительство без ан-тителообразовани’я. Иммунологическая толе­рантность

это частичная или полная утрата способности организма вступать в иммунную реакцию со специфическими антигеном. При лейкозе КРС состояние толерантности может развиваться в случае внутриутробного зара­жения плода инфицированными лимфоци­тами матери в период до проявления иммун­ной компетенции, то есть, в первые 3 месяца развития эмбриона; у отдельных животных, например, у глубоко стельных коров, когда иммуноглобулины накапливаются в секрете молочной железы и т. д. Кроме того, бывают случаи серонегативности при наличии сопутс­твующих инфекций, например, вирусной диа­реи (В. А. Белявская и др., 2003).

Метод не прямого иммуноферментного анализа (ИфА), основанный на применении антивидового конъюгата с использованием ферментов-маркеров, обладает значительно большей чувствительностью, по сравнению с РИД, позволяет автоматизировать процесс, то есть уйти от субъективной оценки резуль­татов реакции. Кроме того, с помощью ИФА можно обнаружить антитела к ВЛКРС в мо­локе и моче (Н.Т. Джапаралиев, Л.Б. Прохва-тилова, А.И. Ломакин, П.К.Аянот,2000; К.Т. Carli, et al.1993; K.T.Carli , Sen А., Н. Batmaz, E.Kennerman,1999). Несмотря на очевидные достоинства, достоверность ИФА все же свя­зана с иммунологическими реакциями, и по­этому не всегда адекватна.

В связи с изложенным выше , с целью ускорения полного оздоровления стад КРС от лейкоза , целесообразно совместно с РИД и не прямым ИФА использовать методы , выявляющие непосредственно вирус или провирус у инфицированных животных .

Перспективной в этом плане является по-лимеразная цепная реакция (ПЦР) (Мальцева Н.А. и др., 2004). Этот метод позволяет выяв­лять провирусную ДНК или вирусную РНК в образце крови животного. Анализ литератур­ных данных,позволяет расположить методы-диагностики лейкоза в порядке возрастания чувствительности, точности и специфичности в следующий ряд: РИД Таким образом, возможны, по край­ней мере, три области успешного приме­нения метода ПЦР в диагностике лейкоза: выявление носителей провируснои ДНК среди РИД и ИфА-отрицательных жи­вотных, исследование вновь завозимых в хозяйство животных и выявление зара­женных телят в раннем возрасте.

В лаборатории биотехнологии СКНИИЖ с использованием метода ПЦР исследовано 1013 образцов крови на наличие провируснои ДНК ВЛКРС. В таблице 1 приведены данные по инфицированности животных различных хо­зяйств ВЛКРС.

Анализируя полученные результаты, хотелось бы отметить следующее. Живот­ные лишь одного из хозяйств (СЗАО СКВО) оказались полностью свободны от носи-тельства провируснои ДНК ЛКРС. Телки голштинской черно-пестрой породы в это хозяйство были завезены из Голландии и не имели контактов с местными животными. Среди других импортных животных (ОАО «Племзавод «Кубань» п=354, завезены из Венгрии) методом РИД не были выявлены положительно реагирующие, а с помощью ПЦР удалось обнаружить 1 носителя прови­руснои ДНК ЛКРС. Более того, провирусную ДНК выявили и в пробе крови теленка, по­лученного от ПЦР — позитивного животного. Носители провируса были удалены из стада. В хозяйстве ООО «Животноводческий комп­лекс «Ольгинский» из 97 проанализирован­ных образцов 67 были получены от РИД — от­рицательных животных. 15 из них оказались ПЦР _ положительными.

Анализируя данные по носительству про-вируса, установили, что процент инфициро­ванных телят к 3-4 месяцам (на основании ПЦР — исследований) практически соответс­твует проценту РИД — позитивных животных того же хозяйства, но в более позднем воз-

расте (к 3 годам). Это, вероятнее всего, сви­детельствует о том, что заражение животных происходит в ранние сроки жизни (транспла-центарно и до 3 мес), а первые иммунологи­ческие признаки болезни появляются у боль­шинства животных после первой лактации. •

Следовательно, если проводить разде­ление телочек методом ПЦР на носителей провируса и здоровых в первые 2-3 неде­ли жизни животного, можно оздоравли-вать хозяйства значительно быстрее.

Коварство такого заболевания как лейкоз заключается в его скрытости. Иногда больное животное годами является вирусоносителем, но при этом не проявляет никаких симптомов. Инфекция передается взрослым особям и молодняку КРС, у которых также медленно поражает организм. Регулярное обследование крупного рогатого скота помогает рачительным животноводам вовремя определить опасный недуг. Единственным эффективным для этого путем является взятие анализа крови.

Вирусоносительство лейкоза

Онкогенный лейкозный вирус РНК вызывает хроническое инфекционное заболевание у КРС под названием лейкоз. Он поражает кроветворные органы и возбуждает начало опухолевого процесса. Если разрезать тушу убитой коровы, можно заметить, что все органы внутри покрыты опухолями.

Течение заболевания проходит три этапа, каждый из которых имеет определённые временные промежутки:

  • инфекционная стадия является начальной, без проявления внешних симптомов, продуктивность и здоровье животного кажутся в норме, но в это время зараженные головы уже вирусоносители и передают белокровие сородичам. До первых признаков может пройти несколько лет;
  • патологическая стадия начинается с проявления внешних признаков: угнетенного состояния, выпучивания глаз, увеличения лимфатических узлов и ряда других. В данный период болезнь можно спутать с другими (туберкулез, мастит и прочие);
  • опухолевая стадия отмечается абортами стельных животных, невозможностью забеременеть, проблемами с пищеварением (понос, запор), потерей веса и снижением продуктивности. После обнаружения явных симптомов и до момента гибели взрослой особи КРС может пройти всего несколько часов, максимум дней. Телятам часто удается растянуть этот интервал до двух месяцев.
  • Взятие анализа крови

    Поскольку лейкемия протекает незаметно, очень важно своевременно диагностировать ее для недопущения распространения. Для этого необходимо использовать достоверные способы обследования на вирусоносительство лейкоза у коров. На сегодняшний день выбор специалистов ложится на серологический метод:

    1. реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД);
    2. иммуноферментный анализ (ИФА).
    3. Антитела с реакцией осаждения взаимодействуют с растворимыми антигенами вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Их находят в срок от четырнадцати до шестидесяти дней после момента инфицирования. Также после этого они могут обнаруживаться на протяжении всего существования коровы.

      Ученые уверяют, что ИФА более точный метод, чем РИД. Более верно он работает на первых порах. Но предпочтительнее использовать результаты от двух тестов, чтобы не оставлять сомнения.

      Исследование крови на лейкоз у коров по методу РИД начинается с взятия сыворотки крови больного животного:

      • на пластинку наносят капельку сыворотки и каплю реактива. Помутнение жидкости укажет на вирусоносительство лейкоза у коров до выявления клинических показателей;
      • проба покажет, был ли у организма указанной особи контакт с вирусом лейкоза;
      • в таком состоянии животное может оставаться до конца жизни, но не болеть и не давать клиники белокровия;
      • при положительных результатах РИД убирают сомнительных коров в стадах, где их процент не превышает десять процентов. Когда «инфицированных» свыше половины, ликвидируются только клинические зараженные головы.
      • Иммуноферментный анализ допускает исследование не только крови, но и молока. Большая чувствительность ИФА дает шанс более оперативно и широко изучать сыворотки крови. Метод показывает поголовье, в которых степень заразности не больше процента.

        Оба указанных метод не могут различить материнские антитела у молодняка от активных. Поэтому телята проверяются, начиная с шестимесячного возраста, когда перестают обнаруживать материнские антитела, не являющиеся показательными при диагностике.

        Чтобы не допустить неправильный результат, нужно соблюдать условия проведения исследования крови на лейкоз у коров:

      • у беременных буренок кровь берется за месяц до родов или после;
      • выявление других возможных инфекционных заболеваний;
      • обнаружение паразитов, избавление от них. После этого ИФА разрешается через месяц, а РИД через два месяца по завершению обработки;
      • любые вакцины применяют после взятия анализов на пробы. Либо по прошествии двух месяцев;
      • гематологическое обследование учитывает подсчет лимфоцитов в крови. Его можно инициировать телятам с полутора лет, если до этого методом РИД и ИФА были найдены антитела ВЛКСР.

    Последний гематологический способ также позволяет развеять сомнения при тесте РИД.

    Если по РИД результат отрицательный, а по итогам гематологической процедуры положительный, то последнюю повторяют через шестьдесят дней.

    При равно положительном выводе корову отправляют на убой. А если и после повторного обследования РИД остается отрицательным в отличие от гематологического метода, животное признается здоровым.

    Сроки исследования крови

    Для проведения исследований в хозяйствах без карантина существуют благоприятные периоды. Владельцы крупного рогатого скота должны их учитывать, чтобы не допускать заболевания лейкемией:

    Полезная информация
    1 перед стойловым периодом в середине или поздней осенью коров обрабатывают от паразитов, через пятьдесят дней можно организовать серологические и гематологические процедуры
    2 перед выгоном стада после завершения зимнего сезона повторяют осенние манипуляции

    Под сомнение ставится поголовье, в котором у некоторых голов РИД и ИФА показали положительный результат, подкрепленный гематологическим. Такое хозяйство называют неблагополучным, в нем проводят противолейкозные мероприятия. Коровы считаются больные лейкозом. Когда в определенном хозяйстве положительные РИД и ИФА, но без гематологических изменений и проявления симптомов, животные лишь инфицированы вирусом.

    Что делать, если анализ на лейкоз положительный?

    Лейкемия считается заболеванием, при возникновении которых чудес не бывает. Самоизлечиться животное не способно, а действенных лекарств еще не разработали.

    Поэтому если анализы на лейкоз у коровы положительные, приходится избавляться от буренки.

    Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
    Уведомить о поступлении

    480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ‘, MOUSEOFF, FGCOLOR, ‘#FFFFCC’,BGCOLOR, ‘#393939’);» onMouseOut=»return nd();»> Диссертация, — 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

    Автореферат — бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

    Метлякова Анастасия Александровна. Морфо-функциональная характеристика органов репродуктивной системы у РИД(+) по лейкозу коров: автореферат дис. . кандидата ветеринарных наук: 06.02.06 / Метлякова Анастасия Александровна;[Место защиты: Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины].- Санкт-Петербург, 2013

    Введение к работе

    Актуальность темы исследования. В современном животноводстве на первое место по актуальности справедливо вышла проблема постоянного воспроизводства имеющегося поголовья и сохранности нарождающегося молодняка. В последние пять десятилетий активно происходило укрупнение молочных ферм и производственных групп, сосредоточение большого поголовья на малых площадях. Основой эффективного ведения животноводства в условиях постоянной интенсификации, является выращивание здорового, хорошо развитого и приспособленного к условиям содержания молодняка. Инфекционные болезни животных препятствуют этому, нанося огромный экономический ущерб сельскому хозяйству, связанный с гибелью животных, потерей продуктивности, введением карантинных мероприятий, т.е. за счет как косвенных так и прямых потерь [27, 31].

    Замена высокопродуктивных коров нетелями в оздоравливаемых стадах снижает валовое производство молока на 6,0%. Экономический ущерб, связанный со снижением молочной продуктивности коров, составляет в среднем 2,5 тыс. рублей в расчете на одну корову [64].

    Заболеваемость КРС лейкозом (персистентным лимфоцитозом) в нашей стране составляет в товарных стадах до 40%, вирусоносительство – до 70%. В связи с этим оздоровление стад КРС в отношении лейкоза является весьма актуальным. В нашей стране и во всем мире оздоровление стад КРС проводят за счет выбраковки вирусоносителей. Для нашей страны такой подход экономически не выгоден из-за высокого уровня вирусоносительства (до 70%) [4,7].

    Анализ физиологических процессов воспроизводства животных убеждает в том, что ключевым этапом репродуктивной функции, с которого начинается повторяемость цикла размножения, является послеродовое восстановление гаметогенной и гормональной функции яичников [10].

    Среди причин выбраковки коров незаразной этиологии ведущее место занимает акушерско-гинекологическая патология, достигая в некоторых хозяйствах до 50% от общего количества выбракованных животных.

    Успешное разрешение многих теоретических и практических вопросов находится в прямой зависимости от расширения диапазона наших представлений о закономерностях течения нормального и осложненного инфекцией послеродового периода [10].

    При недостаточной оздоровительной работе в неблагополучных по вирусному лейкозу крупного рогатого скота хозяйствах профилактика и диагностика акушерско-гинекологической патологии становится особенно актуальной [1].

    Цель работы: Выяснить закономерность морфофункциональных особенностей изменений в органах репродуктивной системы у РИД(+) коров на основе клинических, УЗИ, патологоанатомических, гистологических исследований, а также биохимических показателей крови и предложить способы их коррекции.

    Изучить распространение лейкоза крупного рогатого скота по Удмуртской Республике с 2010 по 2012 гг. и сопоставить их с ретроспективными данными акушерско-гинекологической диспансеризации в обследуемых хозяйствах за 2010 – 2012 гг.

    Провести мониторинг состояния репродуктивной системы РИД(+) и РИД(-) коров в обследуемых хозяйствах.

    Проанализировать данные ректального и ультразвукового исследований половой системы коров.

    Исследовать макро- и микроморфологические изменения в половой системе у РИД(+) коров и сопоставить их с изменениями в биохимических показателях крови.

    Выявить влияние профилактических и терапевтических средств на акушерско-гинекологическую патологию у РИД(-) и РИД(+) коров.

    Научная новизна: заключается в системном подходе к решению поставленных задач, позволяющих подробно изучить морфофункциональные изменения в половой системе у РИД(+) и РИД(-) коров в зависимости от физиологического состояния. Впервые проведен комплексный мониторинг состояния репродуктивной функции коров в стационарно неблагополучных по ВЛКРС хозяйствах УР. Определены морфо-функциональные изменения органов половой системы.

    Теоретическая и практическая значимость работы: в работе особое внимание было уделено развитию акушерско-гинекологической патологии у РИД(+) коров. Полученные данные показывают, что происходит изменение интенсивности восстановительных процессов в половой системе РИД(+) коров в послеродовой период. Результаты настоящего исследования вносят вклад в ветеринарную морфологию, акушерство и гинекологию животных, а также в изучение эпизоотологии ВЛКРС и дают дополнительную информацию о патогенезе акушерско-гинекологических заболеваний при ВЛКРС. Полученные данные могут быть использованы в практической работе и учебном процессе.

    Апробация результатов исследования. Основные результаты исследований, положения и выводы работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию государственности Удмуртии «Научное обеспечение инновационного развития АПК», 16-19 февраля 2010 г. Ижевск Ижевская ГСХА, Всероссийской научно-практической конференции «Инновационному развитию АПК и аграрному образованию – научное обеспечение» 14-17 февраля 2012года, Ижевск, ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА, на II этапе Всероссийского конкура на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых по ПФО, ФГБОУ ВПО КГАВМ им. Н.Э Баумана, Казань 24 – 25 апреля 2013 г. и на III этапе Всероссийского конкура на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых, МВА им. К.И. Скрябина, Москва 28-29 мая 2013 г.

    Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 4 в журналах рекомендованных ВАК РФ.

    Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и состоит из введения, основной части и заключения, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 30 рисунками. Список литературы включает 235 источников, в том числе 60 иностранных авторов.

    Донник И.М. ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», г. Екатеринбург
    Трофимов О.В., Пак И.В. ФГБОУ ВО «Тюменский государственный университет», г. Тюмень

    Лейкозы — гетерогенная группа злокачественных заболеваний крови, для которых характерна экспансия незрелых бластных клеток. Точные молекулярные механизмы возникновения и прогрессии лейкозов до сих пор не установлены. В злокачественных клетках с высокой частотой выявляются мутантные гены, в норме ответственные за пролиферацию и дифференцировку кроветворных клеток-предшественников [2]. В настоящее время во многих лабораториях мира ведутся работы, направленные на изучение свойств «лейкозных онкогенов» и их вклада в развитие лейкозов у человека и животных.

    Первые случаи лейкоза крупного рогатого скота в нашей стране были официально зарегистрированы в 1965 году, и с этого времени идет неуклонный рост заболеваемости, а многочисленные попытки справиться с распространением заболевания в большинстве случаев оказались безуспешными. Это связано с целым рядом причин: широким распространением в сельскохозяйственных предприятиях и организациях разных форм собственности, отсутствием средств терапии и профилактики. Однако все причины экономического характера лишь усугубляют ситуацию, и устранение их не решит основной задачи — ограничения распространения данного заболевания. Добиться успехов в решении этой проблемы можно лишь благодаря созданию системы, включающей меры профилактики и лечения животных, которая может быть разработана только на основе знания механизмов передачи и развития заболевания, а также устойчивости животных к возбудителю лейкоза. В последние годы учеными достигнуты определенные успехи в изучении возбудителя болезни — вируса лейкоза крупного рогатого скота, расшифровке патогенетических особенностей проявления инфекции. Эти успехи, во многом, связаны с работами ученых США, Бельгии, Германии, Японии и России. Однако, несмотря на эти достижения, основная задача по выяснению механизмов развития лейкоза и создания универсальной методики дифференцированного определения лейкоза до сих пор не решена.

    Целью настоящей работы явилось исследование изменений, характерных для лейкемической крови, которые существенны не только для понимания фундаментальных механизмов и закономерностей протекания заболевания, но и определения на этой основе целесообразности применения геномных и постгеномных технологий для поиска ранних маркеров заболевания.

    Материалы и методы исследований. Научно-исследовательская работа проведена сотрудниками кафедры экологии и генетики на базе научно-образовательного центра молекулярной биологии и биотехнологии (НОЦ МБиБ) Тюменского государственного университета и кафедры инфекционной и незаразной патологии Уральского государственного аграрного университета. Исследованию были подвергнуты пробы крови от РИД-положительных (1 275 шт.) и контрольных РИД-отрицательных (169 шт.) коров чёрно-пестрой породы возраста (от 1 года до 1,5 лет) из сельскохозяйственных предприятий Урала.

    Мазки крови животных готовили по стандартной методике [6]. После чего их окрашивали 2%-ным раствором Гимза. Выявление активности миелопероксидазы проводили по методу Вашбурна, модифицированному Лилли [5]. Приготовленные препараты рассматривали с использованием микроскопа «Axiostar» фирмы «Zeiss» при увеличении в 1000 раз.

    Белки сыворотки крови животных анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (до-децилсульфата натрия) по методу Лэммли с использованием 5%-го концентрирующего и 12%-го разделяющего гелей [7]. Анализируемые препараты сыворотки предварительно разбавляли в 250 раз деионизованной водой. Электрофорез проводили в камере «Mini-Protean Tetra Cell» фирмы «Bio-Rad» при напряженности поля 15 В/см. Гели окрашивали серебром [8]. Статистическая обработка данных проводилась по стандартным методикам [1, 4].

    Результаты и обсуждение. Предварительное исследование мазков крови, приготовленных с использованием материала от РИД-положительных (больных лейкозом) и РИД-отрицательных (контрольных) животных, выявило разнообразие лейкемоидных реакций, что, очевидно, является отражением наличия нескольких форм лейкоза.

    В крови больных животных выявлены особенности, которые отсутствуют в контроле. У больных лейкозом коров отмечали высокую частоту скоплений бластных клеток (рисунок 1). Следует отметить, что скопления бластных клеток в мазках крови встречаются и у здоровых животных, как это отмечалось ранее [3], но с меньшей частотой.

    Рис. 1. Скопления бластных клеток в крови больных лейкозом коров

    У больных лейкозом животных изменялся качественный состав лимфоидных элементов: появлялись широкоцитоплазменные лимфоциты, двуядерные формы, тени Боткина-Гумпрехта (рисунок 2), которые отсутствовали у контрольных животных. Нередко появление измененных форм лимфоцитов сочеталось с акантоцитозом эритроцитов (рисунок 3).

    Рис. 2. Измененные формы лимфоцитов в крови больных животных

    Рис. 3. Акантоцитоз эритроцитов

    Отмечено появление в лимфоцитах больных животных микроядер, которые являются следствием хромосомных аберраций (рисунок 4), что свидетельствует о нарушении стабильности генетического аппарата клеток больных животных.

    Рис. 4. Микроядра в лимфоцитах больных животных

    Методом ДСН-электрофореза было проанализировано 205 проб сыворотки крови от РИД-положительных коров и 55 проб от РИД-отри- цательных коров. В сыворотке крови крупного рогатого скота выявили от 12 до 18 отдельных белковых фракций, обладающих определенной электрофоретической подвижностью (табл. 1 ).

    Таблица 1. Характеристика электрофоретических фракций

    Относительная электрофоретическая подвижность

    Стабильно выявили следующие группы: альбумины, а-глобу-лины, Y-G-глобулины, У-А-глобулины, гаптоглобины, трансферрины, S-фракция. У контрольных животных выявляется от 15 до 18 белковых фракций, соответствующих вышеперечисленным группам. У РИД-положительных животных выявляется меньшее количество фракций от 12 до 15 (рисунок 5). Анализ распределения разных белковых фенотипов (по числу белковых фракций) выявил значительные различия между двумя группами животных (рисунок 6). Различия затрагивают, в основном, минорные фракции в области глобулинов и гаптоглобинов. Очевидно, исчезновение минорных фракций глобулинов у больных лейкозом животных, является отражением нарушения функций иммунной системы, хотя не исключены и другие причины, вызывающие резкое изменение содержания в организме животных белков, участвующих в реакциях иммунитета, процессах свертывания крови, транспорте железа. Одной из таких возможных причин может быть нарушение деятельности регуляторных генов. Общее снижение концентрации глобулинов, вероятно, повлекло за собой и резкое уменьшение концентрации гаптоглобинов, что нашло отражение в отсутствии у некоторых особей соответствующих белковых фракций. С одной стороны, уменьшение содержания гаптоглобина, который с высокой аффинностью связывает гемоглобин, высвобождающийся из эритроцитов, и ингибирует его активность, является признаком анемии, при которой происходит разрушение эритроцитов внутри кровеносного русла с выделением гемоглобина в плазму и потере его. Косвенным подтверждением этого является отмеченный у некоторых больных животных акантоцитоз (рисунок 3), который является признаком анемии. С другой стороны, гаптоглобины относятся к белкам острой фазы, повышение уровня которых отмечается при патологических процессах, и связано со стимуляцией клеток интерлейкинами. На основе имеющихся данных сложно объяснить подобное противоречие, для выяснения этого требуются дополнительные исследования.

    Рис. 5. Мажорные белковые фракции сыворотки крови коров. Электрофорез в 12% полиакриламидном геле. Окрашено серебром.

    Рис. 6. Встречаемость особей с определенным количеством выявляемых белковых фракций в сыворотке крови

    Таким образом, в ходе исследования были выявлены существенные изменения в белковом составе сыворотки крови животных, больных лейкозом. Эти изменения затрагивают преимущественно глобулины и гаптоглобины. Проведение одномерногого электрофореза позволило получить предварительные результаты, свидетельствующие о различии протеомов больных и здоровых животных, и показало, что перспективным направлением исследований является поиск маркеров лейкоза крупного рогатого скота в области минорных белковых фракций посредством проведения двумерного электрофореза.

  • Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика. М.: Мир. 1988. Т.3. 335 с.
  • Баскаран Д, Спирин П.В., Прасолов В.С. Активированные лейкозные онкогены, определяющие злокачественное перерождение кроветворных клеток // Молекулярная биология. 2010. Т.44, №3. С. 418-430.
  • Герунова Л.К., Околелов В.И., Бойко Т.В. Гематотоксическое действие пестицидов на теплокровных животных // Сельскохозяйственная биология. 2003. № 4. С. 75-78.
  • Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. 1980. 291 с.
  • Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969. 624 с.
  • Роскин ГИ. Микроскопическая техника. М.: Советская наука, 1951. 447 с.
  • Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
  • Oakley B.R., Kirsch D.R., Morris N.R. A simplified ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels // Anal. Biochem. 1980. Vol. 105. P. 361-363.
  • Резюме. Лейкозы — гетерогенная группа злокачественных заболеваний крови, для которых характерна экспансия незрелых бластных клеток. Точные молекулярные механизмы возникновения и прогрессии лейкозов до сих пор не установлены. Авторами проведены исследования изменений, характерных для лейкемической крови, которые существенны не только для понимания фундаментальных механизмов и закономерностей протекания заболевания, но и определения на этой основе целесообразности применения геномных и постге-номных технологий для поиска ранних маркеров заболевания. На основе проведенных гематологических исследованиях коров, больных лейкозом крупного рогатого скота, выявлен ряд особенностей цитогенетического и протеомного характера. У больных лейкозом коров отмечается высокая частота скоплений бластных клеток, изменяется качественный состав лимфоидных элементов: появляются широкоцитоплазменные лимфоциты, двуядерные формы, тени Ботки-на-Гумпрехта. Нередко отмечается акантоцитоз эритроцитов. Также наблюдается появление в лимфоцитах больных животных микроядер. Отмечаются изменения белкового состава сыворотки крови. У больных животных снижается количество выявляемых белковых фракций сыворотки. Различия затрагивают, в основном, минорные фракции: глобулины и гаптоглобины. Проведение одномерногого электрофореза позволило получить предварительные результаты, свидетельствующие о различии протеомов больных и здоровых животных, и показало, что перспективным направлением исследований является поиск маркеров лейкоза крупного рогатого скота в области минорных белковых фракций посредством проведения двумерного электрофореза.

    Ключевые слова: лейкоз крупного рогатого скота, кровь, сыворотка крови, мазок, цитогенетические исследования, маркеры лейкоза, протеомные изменения, бластные клетки, микроядро, белковые фракции.

    Автор: Метлякова А.А., Мерзлякова Е.А., Хамитова Л.Ф.

    Бесплатный доступ

    Среди инфекционных патологий крупного рогатого скота одно из первых мест принадлежит гемобластозам, к ним относят и лейкоз крупного рогатого скота. Часто в патологический процесс вовлекаются внутренние органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. В яичниках у РИД-положительных коров при гистологическом исследовании специфических изменений не обнаружено, все изменения носят неспецифический характер.

    Лейкоз , крупный рогатый скот , яичники , гистология , фолликулярная киста , нарушение обмена веществ , макроскопический анализ , неспецифические изменения