Исследование крови на лейкоз у коров

Особенности анализа на лейкоз КРС.

Все люди которые держат или разводят крупный рогатый скот сталкивались с плановым исследованием на лейкоз крс. Которое проводится дважды в год с интервалом в 6 месяцев. В этой статье мы рассмотрим некоторые особенности анализа на лейкоз КРС.

Во время этой процедуры вет.работники невсегда честны с владельцами коровок. Это заключается в следующем. Сначала берется кровь на анализ по РИД (реакция иммуна дифузии), если по ней животное признается здоровым, то есть РИД отрицательным, вы следующие пол года живете спокойно.

Если же животное признают больным, то есть РИД положительным, то проводят еще гематологический анализ. Если животное признают гемположительным, то коровке прямяком на мясо.

Если животное гемотрицательным, то животное можно отправить на убой, можно держать животное дальше, но изалированно от здоровых с последующим исследованием по гематологии раз в пол года.

А вет.работники делают следующее, берут кровь от РИД положительных коров для исследования и по РИД и по гематологии, хотя нужно одно гемисследование. Тем самым выкачивают лишние деньги из владельцев КРС.

Вот такие они, некоторые особенности анализа на лейкоз КРС.

Телефон горячей линии на время ЧМ по футболу +7 (495) 700-01-37

За период с 9 по 24 января 2017 в Калужское территориальное отделение ФГБУ ЦНМВЛ для проведения исследований поступили образцы 1270 проб патологического и биологического материала.

При проведении исследований сыворотки крови от КРС выявлены две положительные пробы на лейкоз.

Важным условием профилактики и борьбы с лейкозом крупного рогатого скота является своевременная достоверная диагностика и изоляция больных и подозреваемых

в заболевании животных.

Диагностика лейкозов осуществляется клиническими, гематологическим, серологическими, патологоанатомическим и гистологическим методами

Прижизненный диагноз ставят на основании клинических данных и результатов лабораторного исследования цельной крови и сыворотки крови.

В настоящее время основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический: реакция иммуннодиффузии (агаровом геле РИД). Гематологический и клинический методы используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных.

Исследования на лейкоз РИД в качестве диагностического теста начинают проводить у круп­ного рогатого скота с 4-6 месячного возраста. В сыворотке крови зараженного вирусом лейкоза крупного рогатого скота обнаруживают специфические антите­ла, индуцированные вирусом лейкоза крупного рогатого скота, в виде линий преципитации. Выявление этих антител свидетельствует о персистенции вируса лейкоза КРС в организме круп­ного рогатого скота.

РИД выявляет зараженных животных на всех стадиях инфекционного процесса, за исключением инкубационного периода.

Сущность гематологического метода заключается в обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабо дифференцированных клеток (родоначальных пролимфоцитов, лимфобластов), а также полиморфных, атипичных клеток кроветворных органов.

Гематологический и клинический методы используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных.

Читайте так же:

  • Части туловища коровы Строение тела сельскохозяйственных и домашних животных Тело животных условно подразделяют на четыре отдела: голову, шею, туловище с хвостом и конечности. Голову разделяют на мозговую и […]
  • Возраст телки и коровы О первых месяцах выращивания телят уже рассказывали в газете «Сам хозяин» (№24, 2007 г. и №2, 2008 г.) Теперь остановимся на молодняке старшего возраста. До 6-месячного возраста […]
  • Мышцы лопатки коровы Мышцы в теле животного подразделяются на мышцы головы, туловища и конечностей. В зависимости от выполняемой работы и функций мышц при жизни животного (одни мышцы несли очень большую […]
  • Корова не ест и не дала молока Главная Вопросы и ответы Животные: общие вопросы Корова может не давать молока или сбавляет надой по множеству причин. Стоит их разделить на физиологические и […]
  • Доильный аппарат адм-1 § 14. Доильный агрегат АДМ-8 Доильный агрегат АДМ-8 (рис. 23), предназначенный для машинного доения коров в стойлах, создан в результате усовершенствования установки "Даугава". Молоко […]
  • Вымя коровы схема Вымя коровы состоит из двух пар сгруппированных вместе молочных желез, функционирующих одновременно и независимо друг от друга. Животные с третьей парой желез (полимастией) встречаются […]

Рекомендации по отбору и доставке проб биологического материала для серологических исследований :

Отбор проб крови проводят стерильными иглами. Кровь берут в количестве 5-7 мл. Для получения сыворотки кровь выдерживают в течении часа при температуре 30 0 С для свёртывания, сгусток крови от стенок отделяют специальной спицей, затем пробирки выдерживают при температуре 4-10 0 С. Через сутки сыворотку отделяют в сухие стерильные пробирки.

Пробы нумеруют в соответствии с описью животных и направляют для исследования в лабораторию в свежем или консервированном виде.

Консервирование сывороток проводят:

— добавлением 1 капли 5% раствора фенола на каждый мл сыворотки при тщательном перемешивании, пригодны для исследования в течение 30 суток;

— сухой борной кислотой до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка, пригодны для исследования в течение 30 суток;

— путём однократного замораживания, пригодны для исследования в течении 3 суток.

Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 суток со дня взятия крови, при условии хранения их при +4 — +8 0 С.

Отбор и доставка проб крови для гематологических исследований :

Отбор проб крови проводят стерильными иглами в подготовленные соответствующим образом пробирки, используя свежий антикоагулянт (трилон «Б»)

Из расчёта 1 капля 10% раствора (на дистиллированной воде) на 1 мл крови. Так же для гематологического исследования можно использовать пробирки произведённые фабричным способом.

Для предотвращения свёртывания крови содержимое пробирки сразу же тщательно перемешивают. Для обеспечения качественного результата исследований необходимо чётко контролировать время и условия хранения проб до выполнения анализа. Стабилизированную кровь до исследования хранят в холодильнике при температуре +4- +8 0 С и исследуют не позднее, чем через 36 часов с момента взятия.

Пробы крови нельзя замораживать, нельзя встряхивать (при транспортировке), нельзя долго хранить, т.к. изменяются некоторые характеристики форменных элементов крови, что приводит к ошибочным результатам.

Контакты в городе Калуга: ул. Московская, д.311, тел.: 8(4842)79-33-17,

Диагностические исследования лейкоза КРС

У крупного рогатого скота проводится прижизненная, предубойная и послеубойная диагностика на лейкоз. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые включают серологические, гематологические и гистологические исследования.

Прижизненная диагностика лейкоза

Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования – реакция иммунодиффузии в агаровом геле (РИД).

Из числа положительно реагирующих по РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического и клинического методов, выявляют больных лейкозом.

При первичной постановке диагноза в хозяйстве, на ферме, в стаде проводят диагностический убой больных животных с последующими патологоанатомическими и гистологическими исследованиями. Больными признаются РИД – положительные животные, у которых при однократных гематологических исследованиях установлены изменения, характерные для данной болезни.

Серологический метод диагностики лейкоза КРС

У животных зараженных ВЛКРС, вырабатываются антитела к вирусным антигенам. Характерная особенность инфекции ВЛКРС – это появление специфических антител в крови через 2 – 8 недель после заражения и пожизненное сохранение в организме инфицированных особей. Серологическими методами ВЛКРС можно выявлять у животных только старше 6 месяцев, т.к. у телят, выпаиваемых молоком и молозивом инфицированных ВЛКРС матерей, имеются пассивно приобретённые материнские антитела, которые персистируют (сохраняются) до шестимесячного возраста.

Метод реакции иммунодиффузии (РИД) основан на обнаружении в сыворотки крови животных специфических преципитирующих антител против вируса лейкоза крупного рогатого скота. Пробы крови для исследования отбирают не ранее, чем через 30 – суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных коров – за 30 суток до и после отёла. Животные, сыворотки которых дали положительный результат в РИД, считаются заражёнными вирусом лейкоза, их необходимо исследовать гематологическим методом.

В периферической крови наблюдают количественные и качественные изменения клеток, особенно лейкоцитов, являющиеся одним из существенных признаков лейкоза. Метод заключается в количественной и качественной оценке лейкоцитов периферической крови животных, отнесенных по результатам РИД к группе инфицированных ВЛКРС.

При гематологическом исследовании осуществляют:

подсчет количества лейкоцитов при помощи электронных счётчиков или в камере Горяева;

дифференцированный подсчёт лейкоцитов в мазках (выведение лейкоформулы) или лимфоцитов при помощи фазово – контрастного микроскопирования крови в камере Горяева;

оценку количества лейкоцитов и абсолютного количества лимфоцитов по «лейкозному ключу»

Объектом гематологического исследования является периферическая кровь, пунктаты костного мозга, селезенка, лимфоузлы. Кровь для этих исследований берут из ярёмной вены в пробирки с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта используют трилон Б из расчёта 1 капля 10 % — ного раствора на 1 мл крови, гепарин, или 6 % раствор лимоннокислого натрия (1 капля на 1 мл крови). Стабилизированную кровь до исследования хранят в холодильнике при температуре 2 – 4 градуса С и исследуют не позднее, чем через 36 часов с момента взятия.

Дифференцированный подсчёт лейкоцитов (выведение лейкоцитарной формулы) проводят при обнаружении повышенного их количества. Для этой цели готовят мазки крови, которые фиксируют в этиловом спирте и окрашивают по Романовского – Гимза. Лейкоцитарную формулу выводят по результатам дифференцированного подсчета 100 клеток в окрашенных мазках крови под микроскопом с иммерсионной системой. Количество отдельных элементов крови выражают в процентах.

Животные относятся к категории больных по результатам однократного гематологического исследования. Животных, подозреваемых в заболевании лейкозом, подвергают дополнительному гематологическому исследованию через 1 – 2 месяца. При повторном подтверждении диагноза их считают больными.

Сущность метода заключается в обнаружении в периферической крови и кроветворных органах накопления морфологически изменённых, преимущественно незрелых или патологических клеток.

Мазки, приготовленные на предметных стёклах, а также препараты – отпечатки, приготовленные из материала, взятого при биопсии, или из кусочков органов при убое животного, фиксируют в спирте, окрашивают по Паппенгейму и исследуют под микроскопом с иммерсионным объективом при увеличении 90.

Результаты считают положительными на лейкоз, если в мазках крови более 3 %, а в кроветворных органах более 10 % родоначальных, слабодифференцированных (пролимфоциты, лимфобласты, миелобласты) или опухолевых клеток, которые отличаются от нормальных по форме, величине, структуре и тождественны клеткам, образующим опухоли.

Для прижизненной дифференциальной и экспресс – диагностики гемобластозов на начальных стадиях лейкозного процесса применяется трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия.

Сканирующая микроскопия позволяет оценить поверхностную архитектонику, а трансмиссионная – ультраструктуру инфицированных и «лейкозных» лимфоцитов. Метод электронной микроскопии включает в себя:

выделение лимфоцитов или лейкоцитов из крови или лимфы;

взятие кусочков лимфоузлов размером 0,5 * 1,0 см;

фиксацию, обезвоживание и заливку материала в эпоксидную смолу;

приготовление ультратонких срезов, их окраска солями тяжёлых металлов – цитратом свинца и уранилацетатом;

исследование в электронном микроскопе и фотографирование полученных объектов на фотопластины.

Вирус лейкоза КРС обнаруживается только in vitro при культивировании лейкоцитов крови и лимфы в течение 24, 48, 72 часов. Зрелые вирионы имеют ультраструктуру, типичную для онкорнавируса типа С. Вирусные частицы образуются на поверхности клетки (лимфоцита) или в цитоплазматических вакуолях.

Лейкозные лимфоциты имеют чёткие отличия от нормальных клеток. У них находят: полиморфизм ядра, гипертрофию мембранного аппарата, дубликацию ядерных и поверхностных мембран митохондрий, появление ядерных аномалий – ядерных карманов (самый важный признак).

В одном лимфоците обнаруживают от одного до шести и более ядерных карманов. Эти аномалии являются потогномоничными (специфическими) для лейкозных лимфоцитов.

Клинические признаки злокачественных заболеваний кроветворной ткани КРС – гемобластозов – складываются из наблюдений за больными животными. Они разнообразны и зависят от формы и стадии течения болезни. Выявляются чаще у животных 4 – 8 – летнего возраста и протекают в основном хронически (2 – 5 лет). Инфекционный процесс при лейкозе КРС характеризуется стадийностью. Различают 4 стадии болезни: инкубационную (онковирусная инфекция), начальную, развёрнутую и терминальную. Болезнь протекает вначале бессимптомно, а затем проявляется лимфоцитозом и (или) образованием опухолевых разрастаний в кроветворных, лимфоидных органах и тканях.

При клинической диагностике применяют общие методы исследования: осмотр животного, пальпацию поверхностных лимфоузлов, термометрию, аускультацию, перкуссию, ректальное исследование лимфоузлов и органов тазовой полости.

Помимо поражения кровеносной и лимфоидной систем часто в патологический процесс вовлекаются внутренние органы, не имеющие отношения к кроветворению. Поэтому и клинические признаки могут быть неспецифические, отображающие функциональные нарушения той или иной системы органов вследствие опухолевых разрастаний, и специфические, характерные для отдельных форм лейкоза.

Неспецифические признаки выражаются расстройствами функций организма общего характера. У животных ухудшается общее состояние, наблюдается отсутствие аппетита, снижение удоя, быстрая утомляемость, исхудание. Нередко отмечают расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта (диарея, запоры, атония, тимпания преджелудков). Опухолевые разрастания в сердце обуславливают ослабление сердечной деятельности, провоцируют симптомы травматического перикардита, цианоз, желтушность слизистых оболочек, нарушения дыхания, отёки подкожной соединительной ткани в области подгрудка, живота, вымени, подчелюстного пространства. Наблюдают увеличение одной или нескольких долей вымени (вначале без нарушения лактации).

В патологический процесс нередко вовлекается печень, она увеличивается в объёме. При резком увеличении её задний край пальпируется через брюшную стенку.

Специфические (патогномонические) клинические признаки характеризуются увеличением поверхностных (предлопаточных, околоушных, нижнечелюстных, надколенных, надвыменных) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфоузлов (глубокие паховые, крестцовые). Обнаруживается увеличение матки, мочевого пузыря, пучеглазие – экзофтальм за счёт опухолевых разрастаний. Характер и степень поражения лимфоузлов различны, зависят от формы болезни. Внутренние лимфоузлы поражаются чаще наружных. Увеличенные лимфоузлы без повышенной температуры, безболезненны, подвижны, эластичной или плотной консистенции. Они могут срастаться в конгломераты.

К специфическим признакам относится увеличение селезёнки. При лимфолейкозе её размеры возрастают в несколько раз, и селезёнка может достигать массы в 25 килограмм; в некоторых случаях капсула разрывается, и животное внезапно гибнет от внутреннего кровотечения.

Клинические признаки проявляются только у 10 – 30% больных лимфолейкозом животных. В результате непостоянного увеличения лимфоузлов при миелоидном, слабодифференцированном лейкозе, гематосаркомах поставить прижизненный диагноз по клиническим признакам даже в терминальной стадии болезни трудно. Необходимо проводить тщательное дифференциально-диагностическое исследование.

Предубойная диагностика лейкоза

Поскольку лейкоз КРС является хроническим, длительно протекающим заболеванием, в развитии болезни различают латентный период, субклиническую и клинико- анатомическую (опухолевую) стадии, то и предубойная диагностика имеет свою особенность.

В латентный период клинических признаков не наблюдается. Животные выглядят по всем клинико-анатомическим показателям здоровыми.

Субклиническая стадия может длиться в течение 2-6 лет и более. Эта стадия диагностируется с помощью серологического (РИД) и гематологического (исследование крови) методов исследования. Клинические признаки в этой стадии также не проявляются. При ветеринарно-санитарной экспертизе органов и туш после убоя животного с такой стадией лейкоза патологоанатомические исследования в них обнаруживаются редко. Гематологическая стадия характеризуется стойким повышением количества по сравнению с нормой лейкоцитов и лимфоцитов. При этом в крови появляются незрелые клетки (пролимфоциты, лимфобласты, миелоциты), что указывает на патологический процесс в гемопоэтической системе. При поступлении на убой таких животных следует уделять особое внимание послеубойной диагностике, что облегчает постановку диагноза на лейкоз. Лейкоз в клинико-анатомической стадии (опухолевой) встречается редко. Эта стадия является терминальной в развитии лейкозного процесса, наблюдается приблизительно у 20% больных животных, характеризуется появлением специфического опухолевидного увеличения лимфатических узлов, заканчивается, как правило, смертью животного.

Дифференцируют от многих хронически и остро протекающих болезней (туберкулёза, бруцеллёза, паратуберкулёза, инвазионных болезней, а также незаразных) тоже сопровождающихся лейкемоидными реакциями

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Люто А. А., Филипьев М. М., Донкова Н. В.

В статье рассмотрена динамика распространения лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района Красноярского края. Установлены особенности проявления лейкоза крупного рогатого скота в хозяйстве. Проанализированы результаты морфологического исследования крови у серонегативных и серопозитивных коров разных возрастов. Предлагаются альтернативные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота .

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Люто А. А., Филипьев М. М., Донкова Н. В.

BLOOD CELLS MORPHOLOGY OF COWS WITH SEROPOSITIVE AND HAEMO-AMBIGUOUS LEUKOSIS REACTION

The dynamics of саttle (ВЛКРС) leukosisdistribution in Private Joint Stock Company “Mayak Agrofirm” in the Sukhobuzimskydistrict of Krasnoyarsk Territory is considered in the article. The cattle leukosismanifestation peculiarities at the enterprise are established. The morphological blood test results of different age seronegative and seropozitive cows are analyzed. Alternative methods of cattle leukosisdiagnostics are offered.

Текст научной работы на тему «Морфология клеток крови коров с серопозитивной и гемосомнительной реакцией на лейкоз»

?УДК619:636.2 А.А. Люто, М.М. Филипьев, Н.В. Донкова

МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК КРОВИ КОРОВ С СЕРОПОЗИТИВНОЙ И ГЕМОСОМНИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИЕЙ НА ЛЕЙКОЗ

В статье рассмотрена динамика распространения лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района Красноярского края. Установлены особенности проявления лейкоза крупного рогатого скота в хозяйстве. Проанализированы результаты морфологического исследования крови у серонегативных и серопозитивных коров разных возрастов. Предлагаются альтернативные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Ключевые слова: крупный рогатый скот, лейкоз, цитологическая диагностика мазков крови.

A.A. Luto, M.M. Filipyev, N.V. Donkova

BLOOD CELLS MORPHOLOGY OF COWS WITH SEROPOSITIVE AND HAEMO-AMBIGUOUS LEUKOSIS REACTION

The dynamics of cattle(ВЛКРС) leukosisdistiibution in Private Joint Stock Company “MayakAgrofirm”in the Sukhobuzimskydistiict of Krasnoyarsk Territory is considered in the article. The cattle leukosismanifestation peculiarities at the enterprise are established. The morphological blood test results of different age seronegative and se-ropozitive cows are analyzed. Alternative methods of cattle leukosisdiagnostics are offered.

Key words: cattle, leukosis, blood dabs cytological diagnostics.

Введение. Проблема вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) является одной из важнейших в современной биологии, медицине и ветеринарии. Болезнь диагностируют на всех континентах мира. Наиболее широко она распространена в Германии, Польше и США. Отмечена неравномерность поражения животных в отдельных странах и хозяйствах. Лейкозом болеют как молодые, так и взрослые животные всех разводимых пород и их помеси, но чаще он отмечается у животных 4-8-летнего возраста. Болезнь обычно наблюдается среди скота красной и черно-пестрой пород [1-8].

Лейкоз крупного рогатого скота имел широкое распространение в 70-80-е годы во всех странах мира. В США зараженность вирусом лейкоза варьировала от 2 до 10% в центральных, до 20% в северо-восточных штатах страны. В Канаде уровень инфицированности ВЛКРС составлял около 10%. В Бельгии, при исследовании 25 тыс. животных фермерских хозяйств (из 80 имеющихся в стране), выявлено 0,1% инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Во Франции по причине лейкоза было убито 11800 коров, хотя 70% фермерских хозяйств официально объявлены свободными от лейкозной инфекции. По результатам выборочного диагностического исследования, в Великобритании до 10% молочного скота поражены вирусом лейкоза [8].

В Российской Федерации в структуре инфекционной патологии лейкоз крупного рогатого скота занимает лидирующее место и составляет 57% от других нозологий. Ежегодно в стране заболевает 40 тыс. животных (по данным мясокомбинатов), и гематологическими исследованиями выявляют более 100 тыс. больных животных. Так, за период с 1976 по 1980 г. заболело 56643; с 1981 по 1985 — 70537; с 1986 по 1990 -165146; с 1991 по 1995 — 236089; с 1996 по 2000 — 227967 голов крупного рогатого скота [6].

В Красноярском крае, по данным Министерства сельского хозяйства [1], зараженность (инфициро-ванность) ВЛКРС по результатам исследований крови реакцией иммунодиффузии (РИД) за период с 2000 по 2010 г. варьирует от 1,95 до 4,0%, а заболеваемость по данным гематологических исследований колеблется от 0,9 до 1,5%.

Цель исследований. Изучить динамику инфицированности и заболеваемости ВЛКРС в одном из хозяйств Красноярского края и установить особенности морфологии клеток белой крови коров с серопозитивной и гемосомнительной реакцией на лейкоз.

Материалы и методы исследований. Исследования проводились в период с 2011 по 2012 г. в ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района Красноярского края.

Объектом исследования являлся крупный рогатый скот в возрасте от 6 месяцев до 7 лет. В ЗАО «Агрофирма Маяк» выращивают крупный рогатый скот молочного направления голштино-фризкой породы: всего 2130 голов, из них коров — 885, молодняка — 760. Средний возраст скота: 4-5 лактаций. В рацион входит: сено — 2кг, концентраты — 5кг, сенаж, все замешивается в кормосмесь. Средний удой составляет 16-18 литров, максимальный суточный удой — 26 литров, сервис-период — 140-180 дней, выход телят — 52%; гибель молодняка до 5-7%.

Ретроспективный анализ инфицированности и заболеваемости животных, по данным статистической отчетности, проведен за период с 2008 по 2011год.

Было сформировано 2 группы: первая группа (опытная), состоящая из инфицированных ВЛКРС (по РИД) гематологически сомнительных коров, и вторая группа (контрольная) из клинически здоровых отрицательных по РИД коров.

Для исследования у животных отбирали пробы крови из яремной вены. Цельную кровь, полученную при добавлении антикоагулянта, подвергли морфологическому анализу на кафедре анатомии и гистологии животных Красноярского государственного аграрного университета, а серологические исследования проб сыворотки крови, в реакции иммунодиффузии (РИД), проводили в КГБУ «Краевая ветеринарная лаборатория” (г. Красноярск, ул. Дудинская, 5г).

Для подсчета уровня лейкоцитов пробы цельной крови разводили в жидкости Тюрка, далее исследовали в камере Горяева и производили подсчет лейкоцитов в 100 больших квадратах.

Мазки крови окрашивали по Паппенгейму (предварительно фиксировали метиленовым синим по Май-Грюнвальду и докрашивали в растворе азур2-эозина по Романовскому) и далее проводили подсчет форменных элементов методом Филлипченко, микрофотосъемку на микроскопе Микмед-5.

Результаты исследований оценивали согласно «Методическим рекомендациям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота» от 23.08 2000 г. № 13-7-2/2130.

Результаты серологических и гематологических исследований проб крови крупного рогатого скота представлены в таблице 1.

Результаты серологических и гематологических исследований крупного рогатого скота на лейкоз

в ЗАО «Агрофирма Маяк»

Показатель 2008 г. 2009 г. 2010 г. 2011 г.

Число исследованных животных, всего: 1859 1744 1456 1055

по РИД 469 482 390 470

по ГЕМО 1390 1242 1066 591

РИД положительные 161 128 146 88

ГЕМО подозрительные 46 53 39 12

ГЕМО положительные 11 10 12 11

Уровень инфицированности животных (положительно реагирующих по РИД) составил в 2008 г. — 34,3%, 2009 — 26,5; 2010 — 37,4; 2011 г. — 18,7 %, что свидетельствует о высокой зараженности ВЛКРС (рис. 1).

Уровень гематологических больных животных составил в 2008 г. — 0,7%; 2009 — 0,8%; 2010 — 1,1%; 2011 -1,8%; уровень сомнительной реакции: в 2008 г. — 3,3%, 2009 г. — 4,2, 2010 г. — 3,6, 2011 г. — 2% (рис. 2).

За период с 2008 по 2011 год в ЗАО «Агрофирма Маяк» произошло сокращение поголовья крупного рогатого скота, что отразилось на количестве исследуемых животных.

Рис. 1. Динамика РИД позитивных животных по годам, % ¦ ГЕМО подозрительные ¦ ГЕМО положительные

2008 2009 2010 2011

Рис. 2. Динамика гемопозитивных животных по годам, %

Показатели абсолютного количества лейкоцитов и уровня лимфоцитов в первой и второй группах приведены в таблице 2.

Результаты исследований лейкограммы животных первой группы (серопозитивной) отражены в таблице 3, показатели контрольной группы (серонегативной) — в таблице 4.

В результате проведенных морфологических исследований крови в первой опытной группе (серопозитивной) выявлено 2 пробы животных, признанных гематологически больными (табл. 3, пробы № 6, 8). В контрольной группе (серонегативной) выявлена по лейкозному ключу подозрительная на лейкоз проба (табл. 4, проба №7).

Соотношение лейкоцитов и лимфоцитов в исследуемых пробах крови

Номер группы Номер животного Кличка Номер пробы Лейкоциты, мкл Лимфоциты, % Лимфоциты, мкл Возраст Диагноз на лейкоз

1 319 Марта 1 9075 66,05 5994,0 8 Сомнительное

54 Умница 3 11925 55 6558,8 5 Сомнительное

74 Рулетка 6 16175 69,5 11241,6 6 Больное

Рада 8 20700 84,5 17491,5 6 Больное

2 81 Люська 2 7600 68 5168,0 7 Здоров

192 Г азель 4 8825 59 5206,8 8 Здоров

25 Нина 5 7300 60 4380,0 8 Здоров

246 Радуга 7 7375 73 5383,8 9 Сомнительное

Лейкограмма крови серопозитивных коров, реагирующих сомнительно

Номер пробы Гемосомнительные (группа 1)

1,1 1,0 0,0 9,0 18,0 0,0 7,0 65,0 100

1,2 0,0 0,0 6,8 21,9 1,4 2,7 67,2 100

3,1 2,0 2,0 12,0 27,0 0,0 7,0 50,0 100

3,2 0,0 4,0 8,0 18,0 0,0 10,0 60,0 100

6,1 1,0 1,0 6,0 14,0 1,0 9,0 68,0 100

6,2 8,0 1,0 2,0 10,0 0,0 8,0 71,0 100

8,1 2,0 2,0 1,0 7,0 0,0 5,0 83,0 100

8,2 3,0 0,0 1,0 2,0 1,0 7,0 86,0 100

Средние 2,1+5,9 1,3+2,7 5,7+6,3 14,7+12,3 0,4+0,6 7,0+3,0 68,8+18,8 100

Лейкограмма крови серонегативных коров (контроль)

Номер пробы Контроль (группа 2)

Моноцит Юный нейтрофил Палочкояд. Сегментоядерн. Базоф. Эозиноф. Лимфоцит Итого

4,1 2,0 0,0 4,0 30,0 0,0 8,0 56,0 100

4,2 7,0 0,0 5,0 22,0 0,0 4,0 62,0 100

2,1 4,5 0,0 4,5 26,0 0,0 6,0 59,0 100

2,2 4,0 0,0 4,0 14,0 0,0 8,0 70,0 100

7,1 0,0 0,0 6,0 19,0 0,0 7,0 68,0 100

7,2 2,0 0,0 5,0 16,5 0,0 7,5 69,0 100

5,1 2,9 0,0 1,6 23,4 0,2 11,5 60,4 100

5,2 3,0 0,0 4,0 21,0 1,0 8,0 63,0 100

Средние 3,2+0,8 0,0 4,3+1,7 21,5+8,5 0,2+0,8 7,5+4 63,4+6,6 100

Из представленных данных следует, что различия в показателях крови серопозитивных и подозрительных по заболеванию животных и контрольной группы имеют наибольшие отличия по составу лимфоцитов (на 5,4%; p Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Разница между исследованными серопозитивными гематологически сомнительными и контрольными пробами мазков крови в относительном составе лейкоцитов достоверна, однако в лейкограммах в обоих случаях не превышает верхних пределов нормы. При этом состав и структура форменных элементов морфологически, при окраске общепринятыми способами, также не имеет существенных различий. Таким образом, гематологически сомнительные пробы при подозрении на лейкоз требуется перепроверять через определенный промежуток времени (1-2 месяца) либо использовать иные методы диагностики гемобластозов крупного рогатого скота, в частности цитохимический или (и) иммуноцитохимический методы диагностики форменных элементов крови, а также гистологический и гистохимический методы диагностики.

1. Агропромышленный комплекс Красноярского края в 2006-2010 гг. — Красноярск, 2001. — С. 60.

2. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота // Приказ от 11мая 1999 г. №359.

3. Гулюкин М.И., Замараева H.B. Медико-биологические аспекты вируса лейкоза крупного рогатого скота // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. — Екатеринбург, 2000. — С. 12.

4. Апалькин В.А., Гулюкин М.И., Петров Н.И. Лейкоз крупного рогатого скота. — СПб.: Петролазер, 2005. — С. 106.

5. Дифференциальная диагностика гемобластозов и онкорнавирусной инфекции у сельскохозяйственных животных / В.П. Шишков [и др.]. — М., 1991. — С. 88.

6. Гулюкин М.И., Иванова Т.А., Грек К.П. Ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Российской Федерации // Состояние и перспективы внедрения достижений ветеринарной науки и практики в сельскохозяйственное производство. — Вологда, 2002. — С.15-17.

7. Карпуть ИМ. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных. — Минск: Ураджай, 1986. — 90 с.

Давно слежу за этой проблемой, и имею достаточно материалов. По нашим данным, больные животные снижают удои на 20-30%, заболевают маститом и гинекологическими заболеваниями, а в хозяйствах ухудшаются финансово-хозяйственные показатели.

Чем же лейкозное молоко опасно? Молоко больных животных содержит продукты метаболизма, обладающие канцерогенными свойствами. Кроме того, такое молоко может стать фактором передачи инфекции, в том числе людям, потребляющим его. При этом опасен не сам возбудитель болезни, который погибает при пастеризации молока, а наличие в таком молоке онкогенных веществ. Поэтому человек, особенно ребенок, потребляющий продукты, полученные от больных лейкозом коров, подвергается опасности получить опухолевые заболевания. Кроме того, есть основания предполагать, что вирус-возбудитель мутирует. И это еще не все.

Экономический ущерб, причиняемый лейкозом, приводит к нарушению селекционно-племенной работы по повышению молочной продуктивности. Преждевременная выбраковка высокопродуктивных животных и их потомства уничтожает уникальный генофонд, созданный в каждом хозяйстве десятилетиями.

Таким образом, ответственно заявляю, что попытка решения столь серьезного вопроса легким путем, – разрешить перерабатывать лейкозное молоко, ухудшит экономическую ситуацию региона, и, главное, — создаст угрозу здоровью человека.

Чтобы российским сельхозтоваропроизводителям не ставили в пример Америку, где, как отмечают, якобы, «спокойно» относятся к проблеме лейкоза, и не видят причин не поставлять на переработку лейкозное молоко, привожу данные компетентных в этом вопросе американских организаций.

Выяснилось, что в США много лет сохраняется неблагополучная эпизоотическая обстановка по лейкозу. Около 50-ти лет назад распространение лейкоза в американских и канадских молочных стадах крупного рогатого скота (КРС), по данным Министерства сельского хозяйства США (USDA), составляло примерно 10%. Поэтому заболеванию не придавали особого значения, и считалось, что лейкоз не обязательно контролировать. В то же время, многие другие страны решили, наоборот, взять на контроль проблему, и, по данным Европейской комиссии, к 2012 году 21 страна и Западная Австралия полностью освободили свои стада крупного рогатого скота от лейкоза. Между тем, это инфекционное заболевание в США незаметно охватило уже 40% молочного скота. По данным USDA, в 83% американских молочных стад, по крайней мере, хотя бы одно животное оказалось зараженным (данные 2013 года). В пределах одного такого стада распространенность болезни может колебаться от 23% до 46%.

Приведу пример одного из штатов Америки, – штата Мичиган, в котором 15 (13,3%) из 113-ти стад не имели коров с положительным результатом теста на антитела и 41 (36,3%) стадо коров первой лактации также не имели положительный результат теста. Привожу этот пример, который наглядно показывает, что одновременно бороться с лейкозом зараженного стада и поддерживать «чистоту» другого молочного стада можно. Эта информация для тех российских фермеров, которые утверждают, что невозможно производить молоко от здоровых коров и одновременно проводить мероприятия по борьбе с лейкозом.

Министерство сельского хозяйства США считает, что экономический ущерб от лейкоза влечет за собой снижение производства коровьего молока, цены на него, вынужденный забой животных, сокращение продуктивного долголетия коров, снижение оборота международной торговли. Ежегодные экономические потери молочной промышленности США оцениваются в 285 млн.долл. для производителей молочной продукции и 240 млн.долл. для конечного потребителя. Сегодня Правительство США выделяет большие средства на борьбу с лейкозом, пересмотрело нормативную документацию, ужесточило контроль ветслужб за эпизоотической обстановкой в фермерских хозяйствах.

В других странах обстановка такова. С 2003 года вирус лейкоза крупного рогатого скота был ликвидирован полностью в 12-ти европейских странах, в том числе в большинстве регионов Польши, Португалии и Италии, и позже еще в восьми европейских странах.

По данным всемирной организации по охране здоровья животных, в список стран, где лейкоз на данный момент отсутствует, входят следующие (в скобках год ликвидации заболевания): Андорра (1994), Кипр (1995), Чехия (2010), Дания (1990), Египет (1997), Эстония (2013), Финляндия (2008), Грузия (1996), Ирландия (1999), Казахстан (2007), Кыргызстан (2008), Новая Зеландия (2008), Норвегия (2002), Словения (2006), Южная Африка (2012), Испания (1994), Швеция (2007), Швейцарии (2005), Тунис (2005), Великобритания (1996).

А это страны, где клиническая болезнь присутствует по настоящее время: Аргентина, Бразилия, Канада, Колумбия, Коста-Рика, Доминиканская Республика, Эквадор, Гватемала, Гондурас, Израиль, Япония, Южная Корея, Никарагуа, Россия, Чили, Украина, США, Уругвай, Узбекистан.

Как вы обратили внимание, в списке неблагополучных по лейкозу стран находится и Россия.

Я хочу призвать фермеров не замалчивать проблему лейкоза в своем хозяйстве. Ослабление борьбы с лейкозом, запугивание «вырезом целых стад молочных коров» или снижением молочной продуктивности ничего не даст, и отбросит ваше хозяйство, животноводство в целом, далеко назад.

Хотите реальную картину перерабатывающей промышленности после всего этого? Пожалуйста: снижение продуктивности коров, распространение эпидемии, молочные заводы будут принимать «грязное» молоко, тратить средства на установку дополнительного оборудования для многоступенчатой очистки молока, «догонять» показатели белка и жира подручным пищевым материалом. Затем придумают новую классификацию сортности такого молока… Об импортозамещении можно забыть навсегда, ну, или на 10-15 лет. О потребителях молочной продукции можно также забыть. Уже сейчас они напуганы развернувшейся дискуссией в молочном сообществе.

Кто-нибудь помнит время, когда несколько лет назад остро вставала проблема сбыта молочной продукции? Тогда компаниями тратились огромные средства на маркетинговые ходы и уловки для того, чтобы заставить покупателя повернуться лицом к молочной полке, и даже Минсельхоз России выделял средства для производства ролика и его показ по российскому телевидению.

Если никто не хочет вернуться в состояние отрасли тех лет, если хоть капля здравого смысла осталась в головах молочников, то уже сейчас обсуждение темы на уровне «бороться – не бороться» должно остановиться! Нужно однозначно сказать – бороться! Да, на это уйдет, как минимум, 10-15 лет. Тем более нужны решительные меры!

А теперь о борьбе и мерах. В стране борьба с лейкозом, как оказалось, совершенно не консолидирована, и отношение к лейкозу в регионах разное. Я бы сказала, — от ответственного до безразличного. Есть регионы, где подошли к проблеме серьезно: разработан комплекс мер по искоренению этого опасного заболевания не только для скота, но и для человека, употребляющего в пищу животноводческую продукцию. А есть регионы, которые все мероприятия по лейкозу проводят… на бумаге. Проще говоря, — ничего не делают. Это преступление! За это надо наказывать!

Безусловно, в регионах существуют программы борьбы с лейкозом. Но они не выполняются, не соблюдаются режимы, скрываются результаты. По-настоящему неблагополучная эпизоотическая обстановка выдается как временное явление, не требующее немедленного вмешательства. Однако это не так. Если на территории субъекта есть хоть одна корова с подозрением на лейкоз, нужно сразу принимать меры. Но животноводы рассказывают, что боясь наложения карантина или предписания по убою больных животных, вынуждены, к сожалению, скрывать действительное положение дел с лейкозом в районе, оставляют больных животных в общем стаде и даже идут на фальсификацию результатов исследований анализов крови вплоть до подмены их образцов, включая идентификационные номера учета животных. Почему? Потому что в одиночку хозяйству не справиться — очень затратно и хлопотно, это требует ежедневного кропотливого труда всего коллектива и соответствующих служб района.

А ведь каждый сокрытый случай заболевания коровы лейкозом усугубляет эпизоотическую обстановку района, и в какой-то момент эпидемия становится неуправляемой. Регион начинает терять стабильность в экономических показателях, ухудшается общая картина, сокращается поток инвестиций. И это может распространиться на молокоперерабатывающие предприятия, которые лишаются поставок качественного молока-сырья, приостанавливаются отгрузки готовой молочной продукции, предприятие терпит убытки и может обанкротиться. И дальше по принципу цепной реакции – недостаток местной продукции на полках, ввоз «чужой» продукции с соседних регионов, ослабление интереса и настороженность населения к местной продукции. Потерять доверие потребителя очень легко, а вот вернуть его…, порой на это уходят годы!

Таким образом, без хорошо продуманной комплексной программы, пошаговых мероприятий, и, безусловно, без финансовой государственной поддержки, лейкоз не искоренить.

В России множество положительных примеров борьбы с лейкозом и полной его ликвидацией.

Очень хорошим примером является Ленинградская область, хозяйства которой в 1990 году были неблагополучными по лейкозу. С 1995 года была начата масштабная работа, и сегодня почти все хозяйства имеют хорошую эпизоотическую обстановку. Можно только предполагать, какую лепту внесла оздоровительная работа в общий рост продуктивности ленинградского стада за этот период на фоне прочих факторов – селекции и технологии.

Другой пример, — Свердловская область, в которой при совместной работе ученых и ветеринарных врачей хозяйств, при поддержке администрации региона, удалось избавиться от лейкоза.

Эффективная работа по борьбе с лейкозом также проводится в Мордовии, Пермском крае, Республике Алтай, Вологодской области и других регионах.

Я убеждена, что нормативные инструкции и региональные программы должны включать комплекс долгосрочных мероприятий по оздоровлению сельскохозяйственных животных от заразных болезней и должны быть финансово подкреплены из местных и федеральных бюджетов. Если мы говорим, что государственную поддержку должны получать эффективные хозяйства, производители качественного молока, то почему молоко от больных коров должно быть товарным?

Переходный период, данный государством сельхозтоваропроизводителям на «избавление» от лейкоза, оказался явно недостаточным. Выше я уже отмечала, — это весьма длительный и кропотливый процесс, на который может быть потрачено немало лет. И, тем не менее, большинство регионов не воспользовались даже этим сроком. Они оказались не готовы, не придали особого значения этому серьезному заболеванию, которое распространяется все больше. Продлить еще на один срок – на переходный период? Но от этого мало что изменится – фермеры будут продолжать игнорировать это заболевание, зачастую вынужденно ввиду экономической ситуации хозяйства. А если еще и государство на законодательном уровне позволит принимать лейкозное молоко…, палец о палец никто не ударит, и мы погрязнем в эпидемиях.

Мое предложение – не отменять приложение 5 из техрегламента «О пищевой безопасности», как того предлагают Союзмолоко и аграрное ведомство, а отложить решение на новый срок, подкрепить его комплексом мер борьбы с лейкозом, организовать мониторинг с определением ключевых показателей и контрольными точками. Не исполнителей наказывать рублем, включать административный ресурс, исключить регион-нарушителя из плана господдержки.

Мои предложения по комплексу мер борьбы с лейкозом на ближайшие 4 года сводятся к следующему:

— Сохранить положения нормативно-правовых актов, запрещающие направлять на переработку молоко от лейкозных коров.
— Ужесточить нормы контроля над лейкозом в товарных хозяйствах и исключить возможность необязательного вмешательства ветслужбы.
— Определить механизм государственного софинансирования на борьбу с заболеванием.
— Разработать пошаговые инструкции по диагностике заболевания и исполнению.
— Актуализировать «Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота», утвержденные в 1999 году (Приказ Минсельхозпрода РФ №359).
— Провести всероссийскую конференцию по лейкозу с целью представления передового опыта субъектов РФ, благополучных по лейкозу.

Людмила Маницкая, исполнительный директор РСПМО

Методы диагностики лейкоза КРС

Николай ДВОЕГЛАЗОВ, канд. вет. наук, старший научный сотрудник лаборатории лейкоза ИЭВСиДВ СФНЦА РАН

Методы диагностики лейкоза КРС

Прежде всего, напомним, что лейкоз КРС относится к так называемым медленным инфекциям. Группа данных заболеваний имеет ряд характерных проявлений: необычно продолжительный инкубационный период (годы), медленно прогрессирующий характер течения процесса, необычность поражения органов и тканей и неизбежный летальный исход.

При лейкозе выделяют несколько стадий развития болезни. Для каждой из них разработаны свои методы диагностики, которые, с одной стороны, позволяют определить конкретную стадию у животного, с другой – говорить о том, что обнаруженные изменения относятся именно к лейкозу КРС. Если смотреть от момента инфицирования, то выделяют следующие стадии: инкубационную, гематологическую и опухолевую (или терминальную).

Методы диагностики бывают: прижизненные и посмертные. К прижизненным относятся клинический, гематологический, серологический и генно­молекулярный. При падеже или вынужденном убое у животных могут находить характерные для лейкоза изменения при помощи патоморфологических и гистологических исследований.

Начнем рассмотрение методов в хронологическом порядке – по мере того, как они возникали. О болезни узнали (первые случаи регистрировали еще в конце 19 века) потому, что на фермах крупного рогатого скота начал происходить падеж, а в тушах находили изменения внутренних органов и тканей (патоморфологический метод). При попытках понять причины падежа отметили, что до смерти у таких животных внешне есть некоторые отклонения от нормального состояния: увеличенные лимфоузлы, экзофтальм, сильное исхудание и др. (клинический метод). В течение 70 лет исследователи могли регистрировать только подобные проявления болезни, не понимая их причины. Значительно позже, в середине прошлого столетия, обнаружили взаимосвязь между клиническими признаками и изменениями в крови. При лейкозе они имели свою специфику, позволяющую отличать данное заболевание от других патологических состояний инфекционной и незаразной природы (гематологический метод). Спустя еще пару десятилетий, после установления вирусной природы лейкоза и обнаружения противовирусных антител, были разработаны первые методы, которые позволяли выявлять инфицированных животных до появления каких­либо видимых проявлений болезни (серологические методы). А также методы, позволявшие обнаруживать непосредственно сам вирус, – генно­молекулярные, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Далее раскроем суть методов подробнее.

Патоморфологический метод

При вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину пораженных органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с кроветворными или лимфоидными (костный мозг, лимфатические узлы, селезенка), а также другими органами и тканями.

В зависимости от степени распространения опухолевых разрастаний в организме лейкозы подразделяются на системные и опухолевые. При системных лейкозах поражаются одновременно все органы гемо­ и лимфопоэза (лимфатические узлы, селезенка, костный мозг). При опухолевых характерна изначальная очаговость поражения лимфоидной ткани, и в первую очередь лимфатических узлов.

Наиболее распространенными формами лейкоза у крупного рогатого скота являются лимфоидный лейкоз и лимфосаркома, реже встречается лимфогранулематоз и очень редко остальные формы болезни.

При лимфоидном лейкозе у животных в 100 % случаев в опухолевой процесс вовлечена селезенка. Капсула ее обычно напряжена, фолликулы гиперплазированы. В селезенке и лимфатических узлах наблюдаются стирания рисунка за счет диффузной пролиферации лимфоидных клеток различной степени дифференциации. Лимфатические узлы в той или иной степени увеличены. На разрезе поверхность саловидная, серо­белого цвета, часто с очагами кровоизлияний и некроза.

При опухолевых формах лейкоза селезенка и костный мозг остаются обычно без изменений. Лимфатические узлы часто имеют асимметричное увеличение. Капсула шероховатая, сросшаяся с соседними органами и тканями. Поверхность разреза серо­белого, серо­желтого цвета, часто с обширными очагами кровоизлияния и некроза. Постоянно выявляют плотные опухолевые образования различной величины и формы, которые образуют иногда большие конгломераты.

При неклассифицируемом лейкозе регистрируются новообразования в тазовой полости.

В остальных органах и тканях (печени, почках, органах пищеварения, матке, скелетной мускулатуре), которые вовлекаются в опухолевой процесс на поздних стадиях развития заболевания, отмечают диффузные или очаговые серо­белые разрастания различной формы и величины.

Гистологический метод

Суть его в том, что в кусочках органов и тканей больного животного обнаруживают характерные для лейкозного процесса изменения в виде диффузных или очаговых разрастаний из размножающихся, нарушивших нормальное созревание и дифференцировку, кроветворных клеток. При разных формах лейкоза также дополнительно обнаруживают ряд специфичных для них признаков, позволяющих проводить дифференциацию.

Клинический метод

Симптомокомплекс при лейкозе крупного рогатого скота обусловлен функциональными нарушениями и морфологическими изменениями в органах и тканях и зависит от опухолевого поражения той или иной системы органов, а полнота их проявления – от стадии течения лейкозного процесса. В предлейкозном состоянии и в начальной стадии болезни клинические симптомы обычно отсутствуют, сохраняются продуктивность и воспроизводительная функция животного. Первые клинические признаки появляются в развернутой стадии лейкоза и прогрессируют по мере его развития. Переход гематологической (субклинической) стадии в клиническую часто происходит после отела, при интоксикации, вторичной инфекции, на фоне стрессовых воздействий.

Помимо органов кроветворения, часто в патологический процесс вовлекаются другие внутренние органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. Поэтому в клинических симптомах можно выделить специфические, характеризующие лейкоз, и неспецифические, отображающие функциональное нарушение той или иной системы органов вследствие их опухолевых поражений.

Неспецифические симптомы представляют собой расстройства общего характера, которые могут наблюдаться при многих болезнях. Чаще всего они выражаются в ухудшении общего состояния животного, плохом усвоении кормов, отсутствии аппетита, снижении удоя, быстрой утомляемости, недомогании и прогрессирующем исхудании. При поражении желудочно­кишечного тракта наблюдается расстройства пищеварения, ослабление сердечной деятельности, цианоз и желтушность слизистых оболочек, нарушение дыхания, отеки в области подгрудка, живота, вымени и подчелюстного пространства.

При сдавливании нервных стволов конечностей или прорастании лейкозной опухоли в спинномозговой канал отмечается хромота на одну или обе задние конечности и слабость, животное с трудом встает или вообще не поднимается.

Поражение мочевого пузыря или преддверия влагалища сопровождается затруднением выделения мочи, а поражение матки – абортом и яловостью.

Характерные симптомы выражаются в увеличении поверхностных (предлопаточных, околоушных, подчелюстных, надколенных, надвыменных и др.) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфатических узлов, селезенки и печени, в появлении опухолевых разрастаний в различных частях тела, органах и орбитах глаз. Последние обусловливают нередко экзофтальмию (пучеглазие) с нагноением глазного яблока. Довольно часто наблюдается последовательное поражение лимфатических узлов, поэтому размеры их варьируют от грецкого ореха до детской головы.

При лейкозе нередко обнаруживают узлы, которые в норме не прощупываются (околоушные, дополнительные надвыменные, шейные и отдельные подкожные, расположенные в различных частях тела). В области голодной ямки, на грудной клетке, в подгрудке, на ребрах, лопатке обнаруживают мелкие, размером до голубиного яйца подкожные лимфоузлы.

К специфическим клиническим симптомам относится и увеличение селезенки, границы которой легко установить при перкуссии. Степень поражения селезенки зависит от формы болезни. При лимфолейкозе селезенка может быть увеличена в несколько раз и достигать массы 25 кг. Сильное увеличение селезенки сопровождается высоким лимфоцитозом в периферической крови, иногда наблюдают разрыв капсулы и внезапную смерть животного от внутреннего кровотечения.

Клиническую стадию лейкоза часто обнаруживают зимой, в конце стельности и в начале лактации. Это объясняется снижением резистентности организма.

Лейкоз у крупного рогатого скота протекает в большинстве случаев хронически. Острое и подострое течение болезни наблюдается лишь в 5­10 % случаев. Поэтому удельный вес клинических симптомов в диагностике лейкозов невелик.

Наряду с энзоотическим лейкозом крупного рогатого скота имеет место и лейкоз молодняка с нередким опухолевым поражением зобной железы. При этом наблюдают затрудненное дыхание, хрипы и слизистое истечение из носовой полости. Диагноз ставят по увеличенным лимфоузлам.

В редких случаях лейкоз может протекать в кожной форме. На теле животного появляются узелковые припухлости по 2,5 см в диаметре, хорошо заметные на шее, спине, крестце и бедрах. Через несколько месяцев происходит инфильтративное поражение внутренних органов, и животное погибает.

Таким образом, характерные клинические признаки, а также опухолевые поражения органов брюшной и тазовой полостей, устанавливаемые ректальным исследованием, являются достоверными диагностическими признаками лейкоза. Неспецифические симптомы, отражающие опухолевые поражения внутренних органов, только в сочетании с показателями крови приобретают диагностическое значение.

Гематологический метод

Этот метод является одним из основных, позволяющих достоверно поставить прижизненный диагноз на лейкоз. Метод заключается в подсчете количества лейкоцитов в единице объема крови и качественной оценке лимфоидных элементов – лимфоцитов. Изменения оцениваются по лейкозному ключу, составленному с учетом возраста животных. В крови отмечают резкое увеличение уровня лейкоцитов, преимущественно за счет лимфоцитов.

Необходимо отметить, что гематологическому исследованию подвергаются только животные, в сыворотке крови которых серологическим методом обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.

Животных, находящихся в гематологической стадии лейкоза, часто называют больными или гембольными. Таким образом, проводя различие между инфицированными животными с изменениями в крови и без них. Однако подобное разделение более чем условно, потому что и те, и другие являются носителями вируса и никогда от него не освободятся (на данном этапе развития ветеринарной науки) и при этом выступают источниками инфекции для здоровых животных. Следовательно, нахождение таких животных в стаде несет постоянную угрозу для свободных от вируса животных.

Серологические методы

Методы основаны на выявлении в сыворотке крови животных при помощи специальных компонентов тест­систем антител к антигенам вируса лейкоза. Специфические антитела появляются в крови через 1­2 мес. после заражения животного вирусом лейкоза и сохраняются пожизненно.

Существует два основных серологических метода – реакция иммунодиффузии или диффузной преципитации в геле агара (РИД, РДП) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте от 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных – за 30 суток до отела или через 30 после него.

Данные методы обладают высокой специфичностью и достаточной чувствительностью, для того чтобы производить объективную оценку эпизоотической ситуации по лейкозной инфекции, а также осуществлять с их помощью оздоровительную работу на сельхозпредприятиях.

ИФА по отношению к РИД имеет ряд преимуществ: является более высокочувствительным, что позволяет с его помощью выявлять большее число инфицированных животных (дополнительно к РИД может выявлять животных с низким содержанием антител в крови); в ИФА можно наряду с сывороткой крови исследовать молоко, молозиво или сухостойный секрет; может быть автоматизирован; вся постановка занимает несколько часов в отличие от 3 дней, требующихся для проведения РИД.

Генно­молекулярный метод

ПЦР представляет собой метод, проходящий in vitro, при котором происходит экспоненциальное увеличение специфического фрагмента последовательности ДНК. ПЦР позволяет обнаруживать геном как вируса (РНК), так и провирусной ДНК (встроенной в геном клеток хозяина) на самых ранних стадиях инфицирования, еще до появления в организме первых специфических противовирусных антител. Первые ПЦР исследования, направленные на выявление ВЛКРС­провируса у крупного рогатого скота, провели H.M. Naif et al. в 1990 году. Также метод позволяет выявлять животных с низкими, для выявления серологическими методами, титрами антител и у толерантных животных – такие животные появляются при внутриутробном заражении плода в первый триместр стельности, они являются вирусоносителями и источником болезни, но сами не вырабатывают антител против вируса лейкоза (ВЛКРС).

Заключение

На современном этапе борьбы с лейкозом для диагностики заболевания широко применяются серологический и гематологический методы. В отдельных регионах применяют ПЦР. И только повсеместное использование методов ранней диагностики позволяет избегать встречи с клиническими и патоморфологическими проявлениями данного заболевания, которые еще каких­то 50–60 лет назад можно было увидеть довольно часто. Использование только гематологического метода не позволяет осуществлять оздоровительную работу в стаде, т.к. он служит исключительно для выявления животных повышенного риска перехода в опухолевую стадию. Поэтому эффективная борьба с лейкозом должна строиться на своевременной серологической и молекулярной диагностике с разделением стада на группы здоровых и инфицированных особей, с постепенной элиминацией последних.

В хозяйствах Оренбургской области для выявления инфицированных ВЛКРС проводилось диагностическое тестирование коров с помощью серологических, гематологических и молекулярно-биологических методов.

Результаты исследований оказались не равнозначными: так исследование сыворотки крови при помощи РИД в агарозном геле позволило выявить 13% инфицированных животных, а методом ИФА в 2,1 раза больше (26,7%). Исследование материала методом РИД и ПЦР показало, что РИД-позитивных было в 11,1% меньше, чем при исследовании методом ПЦР. Применение ПЦР позволило обнаружить вирусспецифическую последовательность в ДНК лимфоцитов у 37,8% животных. Гематологические исследования позволили установить лимфоцитоз у 16,7 % исследуемых коров. А молекулярно-биологическим методом выявлены специфические фрагменты нуклеиновых кислот вируса лейкоза крупного рогатого скота у 61,1% коров, что в 3,66 раза больше. Выявленные несоответствия результатов объяснимы способностью и технической сущностью использованных методов.

При проведении диагностики лейкоза крупного рогатого скота наиболее эффективным является комплексное использование методов РИД, ИФА и ПЦР. Применение в плане оздоровительных мероприятий преимущественно только метода РИД-диагностики, не может обеспечить наиболее полного и достоверного определения уровня инфицированности поголовья крупного рогатого скота. Метод ИФА благодаря высокой чувствительности позволяет выявить вирусоносительство на последней стадии оздоровления хозяйства. Поскольку метода ПЦР в диагностике вируса лейкоза у крупного рогатого скота показал высокую эффективность, следует рекомендовать его в качестве диагностического теста для выявления инфицированных животных на ранних стадиях заболевания.